Tato diplomová práce je zaměřena na vypracování purifikačního protokolu extrakce na pevné fázi s cílem izolovat a identifikovat intaktní cytokininové (CK) nukleotidy z rostlinných pletiv A. thaliana. Teoretická část je věnována cytokininům, jejich metabolismu a dále separační metodě extrakce na pevné fázi a metodám analýzy cytokininových nukleotidů se zaměřením na kapalinovou chromatografii. V experimentální části byla ověřena míra exprese genů IPT4 a IPT8 v rostlinném materiálu A. thaliana. Dále je popsána optimalizace druhého purifikačního kroku s použitím sorbentu funkcionalizovaného kyselinou boritou a spojení s předchozí optimalizovanou metodou s použitím sorbentu diethylaminoethyl Sephadexu. Ze získaných výsledků vyplývá, že po chemické indukci biosyntézy dochází v rostlinném materiálu AtIPT8 k nadprodukci CK nukleotidů. Dále, že je boronátová afinitní extrakce nevhodná na separaci intaktních CK nukleotidů, protože kvůli vysoké koncentraci HEPES pufru a Mg2+ iontů v roztoku je vyvinutá purifikační metoda nekompatibilní s LC/MS analýzou. Finální purifikace CK nukleotidů byla tedy provedena pouze jednokrokově s použitím diethylaminoethyl Sephadexu a elučního činidla 1 mol.l-1 mravenčanu amonného. V rostlinném materiálu AtIPT8 byly tímto způsobem úspěšně identifikovány intaktní iPMP a tZMP, ostatní di- a trifosfáty jsou nestabilní a degradují.This thesis is focused on the development of a purification protokol of the solid phase extraction with the aim to isolate and identify intact cytokinin (CK) nucleotides from plant tissues A. thaliana. Theoretical part is devoted to cytokinins metabolism, separation method of solid phase extraction and analysis methods of cytokinin nucleotides focusing on liquid chromatography. In the experimental part was verified gene expression IPT4 and IPT8 in plant material A. thaliana. The following describes optimization of the second purification step using a functionalized boronic acid as a sorbent and combined with previous optimized method using diethylaminoethyl Sephadex sorbent. The results indicate that after chemical induction of biosynthesis it occurs overproduction of CK nucleotides in plant material AtIPT8. Further, the boronate affinity extraction is unsuitable for separating intact CK nucleotides, because of the high concentration of HEPES buffer and Mg2 + ions in solution is this developer purification method incompatible with the LC/MS analysis. Final purification of CK nucleotides was performed only using a diethylaminoethyl Sephadex and 1 mol.l-1 ammonium formate as an eluant. In the plant material AtIPT8 were successfully identified intact iPMP and tZMP, other di- and triphosphates are unstable and degrade.