Tancer, Jan,
N-acetylaminotransferasa z mechu Physcomitrella patens [rukopis] / Jan Tancer. -- 2021. -- 67. -- Oponent Lenka Luhová. -- Ved. práce David Kopečný. -- Abstract: Tato bakalářská práce je věnována N-acetylaminotransferase (NATA) z mechu Physcomitrella patens. V teoretické části je popsán metabolismus polyaminů, jejich syntéza a degradace se zaměřením na acetylaci a známé enzymy u rostlin a savců. V experimentální části byl klonován gen PpNATA do expresního vektoru pET-28a. Expresí genu v buňkách E.coli byl získán rekombinantní protein obsahující histidinovou kotvu umožňující purifikaci afinitní chromatografií. Pomocí metody SDS-PAGE byla ověřena produkce proteinu, čistota a metodou nano-diferenciální skenovací fluorimetrie bylo ověřena stabilita proteinu a stabilizace vazbou na acetyl-CoA. Pomocí bioinformatických postupů byla predikována sekundární a terciární struktura proteinu na základě dostupných struktur savčí N-acetylaminotransferasy a dále bylo analyzováno vazebné místo pro vazbu acetyl-CoA v modelu PpNATA.. -- Abstract: This bachelor thesis is focused on the N-acetyl aminotransferase (NATA) from the moss Physcomitrella patens. The theoretical part describes the metabolism of polyamines, their synthesis and degradation with a focus on acetylation and known enzymes in plants and mammals. In the experimental part, the PpNATA gene was cloned into the expression vector pET-28a. The gene was expressed in E. coli cells yielding a recombinant protein comprising a histidine-tag allowing the affinity chromatography purification. The protein production and purity were verified by SDS-PAGE, and protein stability and the effect of acetyl-CoA binding was analyzed by the nano-differential scanning fluorimetry. Bioinformatic approaches were used to predict the secondary and tertiary structure of the protein was predicted based on the available structural data of N-acetyl aminotransferases, and the binding site for acetyl-CoA in the PpNATA model was further analyzed.
Luhová, Lenka. Kopečný, David. Univerzita Palackého. Katedra biochemie
acetylace. heterologní exprese. Physcomitrella patens. polyaminy. transferasa. acetylation. heterologous expression. Physcomitrella patens. polyamines. transferase. bakalářské práce
(043)378.22