Number of the records: 1
Příprava mutované cytokinindehydrogenasy z cyanobakterií Nostoc 7120
Title statement Příprava mutované cytokinindehydrogenasy z cyanobakterií Nostoc 7120 [rukopis] / Tereza Štenclová Additional Variant Titles Příprava mutované cytokinindehydrogenasy z cyanobakterii Nostoc 7120 Personal name Štenclová, Tereza (dissertant) Translated title Preparation of mutated cytokinin dehydrogenase from the cyanobacterium Nostoc 7120 Issue data 2013 Phys.des. 55 Note Ved. práce Marta Kowalska Oponent Veronika Smékalová Another responsib. Kowalska, Marta (thesis advisor) Smékalová, Veronika (opponent) Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra buněčné biologie a genetiky (degree grantor) Keywords Cyanobakterie * cytokinindehydrogenasa * Pichia pastoris * Cyanobacteria * cytokinin dehydrogenase * Pichia pastoris Form, Genre bakalářské práce bachelor's theses UDC (043)378.22 Country Česko Language čeština Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Bc. Degree program Bakalářský Degree program Biologie Degreee discipline Molekulární a buněčná biologie book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 00158519-866311798.pdf 30 872.4 KB 26.04.2013 Posudek Typ posudku 00158519-ved-874969707.pdf Posudek vedoucího 00158519-opon-767252419.pdf Posudek oponenta Call number Barcode Location Sublocation Info BP-KBB/184 (PřF-KBO) 3134515545 PřF-Holice PřF, Knihovna Holice - sklad In-Library Use Only
Náplní mé bakalářské práce byla příprava enzymu cytokinindehydrogenasy ze sinice Nostoc PCC 7120 s mutací v aktivním místě. V teoretické části jsem se zabývala cyanobakteriemi, což jsou globálně rozšířené gramnegativní eubakterie a možní předchůdci rostlinných chloroplastů. Mohou fotosynteticky asimilovat a fixovat vzdušný dusík. Cyanobakterie Nostoc PCC 7120 má gen pro cytokinindehydrogenasu (CKX), tento enzym ireversibilně degraduje rostlinné fytohormony cytokininy. Dále jsou shrnuty obecné poznatky o methylotropní kvasince Pichia pastoris, která je používána jako expresní systém kvůli významné extracelulární expresi proteinů. Náplní experimentální části byla amplifikace genu NsCKX pomocí PCR, klonování do vektoru pTYB12/pGAPZalfaA a transformování do E. coli. Vzniklý rekombinantní plasmid pGAPZalfaA::NsCKX byl použit pro expresi v Pichia pastoris. Enzymová aktivita se však nepodařila naměřit. Protein byl také podroben SDS-PAGE elektroforéze, výsledky však nebyly přesné.This thesis deals with a preparation of mutated cytokinin dehydrogenase from the cyanobacterium Nostoc PCC 7120 with a mutation in the active site. The main focus of the theoretical part are cyanobacteria, the globally widespread gram-negative eubacteria and possible ancestors of plant chloroplasts. They can assimilate photosynthetically and fix atmospheric nitrogen. Cyanobacterium Nostoc PCC 7120 has a gene coding for cytokinin dehydrogenase (CKX), an enzyme irreversibly degrading plant phytohormones cytokinins. Further there is a summary of informations about methylotropic yeast Pichia pastoris that is used as an expression system due to its significant extracellular expression of proteins. During the experimental part an amplification of NsCKX gene by PCR was carried. Then the gene was cloned into pTYB12/pGAPZalphaA vector and transformed into E. coli. Recombinant plasmid pGAPZalphaA::NsCKX was subsequently used for the expression in Pichia pastoris. However, no CKX activity was detected. The protein was also analalyzed by SDS-PAGE but results were not accurate.
Number of the records: 1