Number of the records: 1  

Heterologní exprese a studium vlastností enzymu polyaminoxidasy a její splicingové varianty z kukuřice

  1. Title statementHeterologní exprese a studium vlastností enzymu polyaminoxidasy a její splicingové varianty z kukuřice [rukopis] / Zuzana Mičková
    Additional Variant TitlesHeterologní exprese a studium vlastností enzymu polyaminoxidasy a její splicingové varianty z kukuřice
    Personal name Mičková, Zuzana (dissertant)
    Translated titleHeterologous expression and study of properties of a polyamine oxidase and its splicing variant from maize
    Issue data2012
    Phys.des.49 s
    NoteVed. práce Ondřej Plíhal
    Oponent Jaroslav Nisler
    Another responsib. Plíhal, Ondřej (thesis advisor)
    Nisler, Jaroslav (opponent)
    Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor)
    Keywords polyaminoxidasa z kukuřice * alternativní sestřih kukuřičné polyaminoxidasy * genetická transformace kvasinek * Pichia pastoris X33 * rekombinantní enzym * enzymová aktivita * polyamine oxidase from maize * alternative splicing of maize polyamine oxidase * genetic modification of yeast * Pichia pastoris X33 * recombinant enzyme * enzyme activity
    Form, Genre bakalářské práce bachelor's theses
    UDC (043)378.22
    CountryČesko
    Languagečeština
    Document kindPUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitleBc.
    Degree programBakalářský
    Degree programBiochemie
    Degreee disciplineBiochemie
    book

    book

    Kvalifikační práceDownloadedSizedatum zpřístupnění
    00171427-464881715.pdf251.4 MB31.07.2012

    Polyaminoxidasa z kukuřice je monomerický glykoprotein, který obsahuje 1 molekulu FAD jako kofaktor. Enzym je lokalizován v buněčných stěnách semenáčku kukuřice (ve výhoncích a kořenech) a katalyzuje oxidaci polyaminů sperminu a spermidinu a jejich acetylderivátů na sekundární aminoskupině za vzniku příslušného aminoaldehydu (spontánní cyklizace), propan-1,3-diaminu a peroxidu vodíku. Zkrácená forma kukuřičné polyaminoxidasy je genová forma vzniklá z alternativního setřihu s dosud neznámou funkcí, jejíž existence byla potvrzena na úrovni mRNA. Experimentální část práce je věnována přípravě konstruktu zkrácená mPAO ve vektoru pPICZ?A, genetické transformaci kvasinek Pichia pastoris X33 tímto konstruktem a konstruktem mPAO ve vektoru pGAPZ?A a měření enzymové aktivity rekombinantních enzymů mPAO a zkrácené formy enzymu. Pomocí metody Western blot jsem prokázala, že zkrácená forma mPAO v expresním médiu zcela chybí (nebo je přítomna jen ve velice nízké, nedetekovatelné koncentraci). V expresním médiu rovněž nebyla naměřena žádná enzymová aktivita zkrácené mPAO, na rozdíl od média, ve kterém byla exprimována plná forma mPAO.Polyamine oxidase from maize is monomeric glycoprotein, which contains 1 molecule of FAD as cofactor. The enzyme is localized in the cell walls of maize seedlings (in shoots and roots) and catalyzes the oxidation of polyamines spermine and spermidine and their acetyl-derivates at the secondary amino group to appropriate aminoaldehyde (spontaneous cyclization), 1,3-diaminopropane and hydrogen peroxide. Splicing variant of maize polyamine oxidase is the gene form with unknown function, which originates from alternative splicing. Its existence was confirmed at the mRNA level. The experimental part is devoted to the preparation of the construct coding for the short mPAO in the vector pPICZ?A, genetic transformation of yeast Pichia pastoris X33 by this construct and mPAO construct (mPAO in the vector pGAPZ?A) and measurement of enzyme activity of recombinant enzymes mPAO and short mPAO. Using Western blot method, I demonstrated, that in YPD medium, there was no detactable short form of mPAO. Accordingly, no enzymatic activity was measured in the expression medium. In contrast, significant enzymatic activity of the complete form of mPAO was demonstrated.

Number of the records: 1  

  This site uses cookies to make them easier to browse. Learn more about how we use cookies.