Number of the records: 1
Štúdium mutantných foriem nukleozid-N-ribohydrolázy 2b z kukurice (Zea mays)
Title statement Štúdium mutantných foriem nukleozid-N-ribohydrolázy 2b z kukurice (Zea mays) [rukopis] / Eva Hájková Additional Variant Titles Studium mutantnich forem nukleosid-N-ribohydrolasy 2b z kukurice (Zea mays) Personal name Hájková, Eva (dissertant) Translated title The study of mutants of nucleoside-N-ribohydrolase 2b from maize (Zea mays) Issue data 2015 Phys.des. 62 : il., grafy, tab. + CD ROM Note Oponent Lenka Luhová Ved. práce David Kopečný Another responsib. Luhová, Lenka (opponent) Kopečný, David (thesis advisor) Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor) Keywords nukleozid-N-hydroláza * purín * pyrimidín * metabolizmus * kukurica * nucleoside-N-ribohydrolase * purine * pyrimidine * metabolism * maize Form, Genre diplomové práce master's theses UDC (043)378.2 Country Česko Language slovenština Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Mgr. Degree program Navazující Degree program Biochemie Degreee discipline Biochemie book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 00186806-966013542.pdf 43 2 MB 28.04.2015 Posudek Typ posudku 00186806-ved-667015930.pdf Posudek vedoucího 00186806-opon-820743003.pdf Posudek oponenta Průběh obhajoby datum zadání datum odevzdání datum obhajoby přidělená hodnocení typ hodnocení 00186806-prubeh-489952772.docx 01.09.2014 28.04.2015 25.05.2015 1 Hodnocení známkou Call number Barcode Location Sublocation Info DP-KBC/230 (PřF-KBO) 3134517927 PřF-Holice PřF, Knihovna Holice - sklad In-Library Use Only
Táto práca sa zaoberá mutagenéziou, purifikáciou a charakterizáciou nukleozid-N-ribohydrolázy 2b z kukurice (Zea mays). Teoretická časť je venovaná literárnej rešerši, ktorá zahŕňa purínový a pyrimidínový metabolizmus v rastlinách a výskyt nukleozid-N-ribohydroláz v rozličných organizmoch, ich kryštalickú štruktúru a kinetické vlastnosti. Experimentálna čast je zameraná na klonovanie, expresiu génu ZmNRH2b v bunkách baktérie E.coli, miestne riadenú mutagenéziu a purifikáciu príslušných rekombinantných proteínov ZmNRH2b - WT a mutantov H91A, D241A, D241Y, K289A a H249A pomocou afinitnej chromatografie. Analýza pomocou gélovej chromatografie ukázala, že ZmNRH2b sa vyskytuje ako dimér. Potom pomocou CD spektroskopie bolo overené, či sú študované mutantné formy správne zložené. Pre ZmNRH2b a K289A bola stanovená teplotná stabilita. Nakoniec bola preštudovaná substrátová špecifita všetkých proteínov s použitím niekoľkých purínových a pyrimidínových nukleozidov, pre enzýmy boli stanovené kinetické parametre Km a Vlim.This thesis deals with mutagenensis, purification and characterization of nucleoside-N-ribohydrolase 2b from maize (Zea mays). The theoretical part is devoted to literary review, which includes metabolism of purines and pyrimidines in plants and presence of nucleoside-N-ribohydrolases in various organisms, known crystal structures and kinetic parameters. The experimental part focuses on cloning, expression of gene ZmNRH2b gene in E. coli cells, site-directed mutagenesis and purification of the recombinant proteins ZmNRH2b (WT) and mutant variants H91A, D241A, D241Y, H249A and K289A by affinity chromatography. Gel permeation chromatography analysis showed that ZmNRH2b occurs as a dimer and CD spectroscopy measurements confirmed that all variants are properly folded. Thermostability of WT and K289A variant was determined. Finally, the substrate specificity of all variants using several purine and pyrimidine nucleosides was analyzed, and kinetic parameters Km and Vlim were determined.
Number of the records: 1