Cílem této diplomové práce byla optimalizace vhodných podmínek pro chirální separaci vybraných sloučenin s axiální chiralitou na HPLC s využitím polysacharidových kolon. Optimalizované metody byly transferovány z analytického do semipreparativního módu pro následnou izolaci separovaných enantiomerů. V rámci práce byl sledován byl vliv složení mobilní fáze, přídavku aditiv a změn teploty na separační podmínky pro jednotlivé analyty. Součástí měření byla také bližší charakterizace izolovaných enantiomerů pomocí polarimetrické a UV/Vis detekce.The aim of this master thesis was optimalization of adequate conditions for chiral separation of selected compounds with axial chirality by HPLC with the use of polysacharide chiral stationary phases. The optimized separations were transferred from analytical to semipreparative mode for isolation of separated enantiomers. The effect of mobile phase, temperature and additives on separations of individual compounds was discussed. Polarimetric and UV/Vis detection was used as a characterization tool for the isolated enantiomers.