Diplomová práce se zabývá problematikou stanovení reziduí vybraných antibiotik v environmentálních vzorcích (přírodní a odpadní vody) technikou spojení ultraúčinné kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie. Analyty byly stanoveny v celkem 50 vzorcích pocházejících z různých zdrojů na území Olomouce v roce 2019 (říční voda z Moravy, odpadní vody z městské čistírny odpadních vod a kanalizačních systémů lůžkových zdravotnických zařízení). Podstatnou částí práce je vývoj a hodnocení způsobu přípravy vzorku z hlediska výtěžnosti a vlivu matricových efektů. Aplikovaná metoda byla vyvinuta jako multireziduální, což přinášelo problémy z hlediska zajištění dostatečné výtěžnosti extrakce pro celou skupinu analytů, která se vyznačuje širokým spektrem fyzikálně chemických parametrů jednotlivých látek. Společně s analyty byly koextrahovány i některé komponenty matrice, což způsobovalo výrazné interference a matricové efekty plynoucí z ovlivnění účinnosti ionizace v elektrosprejovém iontovém zdroji. Byla studována míra matricových efektů v závislosti na koncentraci matrice ve vzorku. Dále byly provedeny experimenty směřující k vyhodnocení vlivů adsorpce na podílu pevných částic obsažených v reálných vzorcích vod a nestability analytů při redukci objemu extraktů na přesnost a preciznost stanovení.The diploma thesis deals with the problem of determining the residues of selected antibiotics in environmental samples (natural and wastewater) by the combined techniques of ultra high performance liquid chromatography and mass spectrometry. The analyses were determined in a total of 50 samples from various sources in the territory of Olomouc in 2019 (river water from Morava, wastewater from the municipal wastewater treatment plant and sewerage systems of inpatient medical facilities). An essential part of the work is the development and evaluation of the method of sample preparation in terms of recovery and matrix effects. The applied method is multiresidual, which brought problems in terms of ensuring sufficient extraction recovery for the whole group of analytes, characterized by a wide range of physicochemical parameters of individual substances. Along with the analytes, some components of the matrix were co-extracted, which caused significant interferences and matrix effects resulting from influencing the ionization efficiency in the electrospray ion source. Dependence of the magnitude of matrix effects on the concentration of the matrix in the sample was studied. Furthermore, experiments were performed to evaluate how adsorption on solid particles contained in real water samples and analyte instability during reduction of extract volume affect the accuracy and precision of the determination.