Number of the records: 1
Metody detekce replikační aktivity lidských buněk a standardizace jejich použití pro analýzu buněčného cyklu
Title statement Metody detekce replikační aktivity lidských buněk a standardizace jejich použití pro analýzu buněčného cyklu [rukopis] / Anna Kabotová Additional Variant Titles Metody detekce replikační aktivity lidských buněk a standardizace jejich použití pro analýzu buněčného cyklu Personal name Kabotová, Anna, (dissertant) Translated title Methods of determination of replicational activity of human cells and standardization of their use for the analysis of the cell cycle Issue data 2021 Phys.des. 72 Note Ved. práce Anna Ligasová Oponent Karel Koberna Another responsib. Ligasová, Anna, (thesis advisor) Koberna, Karel, (opponent) Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra buněčné biologie a genetiky (degree grantor) Keywords Replikace DNA * modifikované nukleosidy a nukleotidy * buněčný cyklus * imunofluorescence * obrazová cytometrie * DNA replication * modified nucleosides and nucleotides * cell cycle * immunofluorescence * image cytometry Form, Genre bakalářské práce bachelor's theses UDC (043)378.22 Country Česko Language čeština Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Bc. Degree program Bakalářský Degree program Biologie Degreee discipline Molekulární a buněčná biologie book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 00252357-313241842.pdf 42 1.3 MB 07.05.2021 Posudek Typ posudku 00252357-ved-244787187.pdf Posudek vedoucího 00252357-opon-660499111.pdf Posudek oponenta
Předkládaná práce poskytuje přehled několika metod používaných pro detekci replikační aktivity buněk s využitím modifikovaných nukleosidů (5-bromo-2´-deoxyuridinu, BrdU a 5-etynyl-2´-deoxyuridinu, EdU) a nukleotidu (biotin-16-deoxyuridin-5´-trifosfátu). Součástí práce je porovnání těchto metod s ohledem na možnost provedení následné analýzy buněčného cyklu, na sílu poskytovaného signálu a na jejich vliv na fluorescenci fluorescenčních proteinů. Sledované metody byly testovány na pěti lidských buněčných liniích. Výsledky ukázaly, že z testovaných metod byl pro analýzu replikační aktivity a současně analýzu buněčného cyklu buněk nejvhodnější nukleosid EdU, který je detekován klikací reakcí. Naopak nejméně vhodnou metodou bylo použití BrdU v kombinaci s jeho odhalením ve struktuře DNA pomocí 4 N HCl. Tento způsob vedl k denaturaci DNA, což znemožnilo následnou analýzu buněčného cyklu. Pro současnou lokalizaci fluorescenčních proteinů byla nejvhodnější metoda založená na BrdU a působení nukleáz.The thesis presented provides a review of several methods used for the detection of cellular replicational activity by modified nucleosides (5-bromo-2´-deoxyuridine, BrdU and 5- ethynyl-2´-deoxyuridine, EdU) and nucleotide (biotin-16-deoxyuridine-5´-triphosphate). A part of the thesis concerns the comparison of these approaches with respect to the possibility of subsequent cell cycle analysis, the signal strength and their impact on the fluorescence of the fluorescence proteins as well. The investigated methods were tested on five human cell lines. The results showed that nucleoside EdU detected by click reaction was the most suitable nucleoside for analysis of replicational activity and the concurrent cell cycle analysis. On the other hand, the least suitable approach represents the use of BrdU in combination with its revelation in DNA structure by 4 N HCl. This method led to the DNA denaturation making impossible the subsequent analysis of the cell cycle. Method based on BrdU and nucleases treatment emerged as the most convenient for the simultaneous analysis of fluorescent proteins.
Number of the records: 1