Diplomová práce se zabývá studiem syntetických opioidů - fentanylu a jeho analogů pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie se dvěma způsoby detekce - UV a elektrochemickou detekcí. Syntetické opioidy se řadí mezi nové psychoaktivní látky. Jsou velice návykové a dlouhodobé užívání vede ke vzniku závislosti. Cílem práce je vyvinout analytickou HPLC metodu pro izokratickou eluci ke stanovení fentanylu, jeho metabolitu norfentanylu a jeho analogů - thiofentanylu, furanylfentanylu, carfentanylu a sufentanylu. V průběhu experimentů byly testovány celkem čtyři kolony, přičemž nejlepší separaci poskytovala 15cm oktylsilikagelová kolona. Vyvinutá metoda byla úspěšně testována na vzorku moči, v níž se podařilo detekovat a kvantifikovat 5 ze 6 přidaných opioidů.This master's thesis focuses on the study of synthetic opioids - fentanyl and its analogues using high-performance liquid chromatography with two methods of detection - UV and electrochemical detection. Synthetic opioids belong to the category of the new psychoactive substances. They are highly addictive and continuous and repeated usage leads to addiction. The aim was to develop an analytical HPLC method with isocratic elution for determination of fentanyl, its metabolite norfentanyl, and its analogues - thiofentanyl, furanylfentanyl, carfentanyl, and sufentanyl. During the experiments, four columns in total were tested, and the best separation was achieved with a 15cm octylsilane column. The developed method was successfully tested on a urine sample, in which 5 of 6 added opioids were detected and quantified.