Number of the records: 1
Návrh a produkce tagovaných rekombinantních proteinů pro orientovanou vazbu na proteonanoliposomy
Title statement Návrh a produkce tagovaných rekombinantních proteinů pro orientovanou vazbu na proteonanoliposomy [rukopis] / Tereza Filipi Additional Variant Titles Návrh a produkce tagovaných rekombinantních proteinů pro orientovanou vazbu na proteonanoliposomy Personal name Filipi, Tereza (dissertant) Translated title Design and production of tagged recombinant proteins for oriented binding onto proteonanoliposomes Issue data 2018 Phys.des. 71 s. Note Ved. práce Milan Raška Oponent Petr Kosztyu Another responsib. Raška, Milan, 1967- (thesis advisor) Kosztyu, Petr, (opponent) Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor) Keywords rekombinantní protein * HIV * liposomy * Env * gp140 SOSIP P4W * coiled-coil * enterokinasa * recombinant protein * HIV * liposomes * Env * gp140 SOSIP P4W * coiled-coil * enterokinase Form, Genre diplomové práce master's theses UDC (043)378.2 Country Česko Language čeština Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Mgr. Degree program Navazující Degree program Biochemie Degreee discipline Biochemie book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 00221609-431774661.pdf 46 1.5 MB 27.04.2018 Posudek Typ posudku 00221609-ved-708969517.pdf Posudek vedoucího 00221609-opon-210902805.pdf Posudek oponenta
HIV neboli virus lidské imunodeficience je retrovirus, který u nakažených způsobuje terminální syndrom získané imunodeficience AIDS. Toto onemocnění a jiné problémy spojené s nákazou virem HIV stojí každoročně životy mnoho pacientů. Předložená práce se soustředí v teoretické části na shrnutí dosavadních poznatků v oblasti vývoje vakcíny proti HIV, představení rekombinantních proteinů jako klíčové komponenty vakcín a přibližuje jejich přípravu, včetně metod purifikace. Dále je zde popsána gp140 SOSIP varianta rekombinantního glykoproteinu Env identifikovaného u pacienta WEAU v chronické fázi HIV-1 infekce (označeného P4W) a liposomální nanočástice, použitelné jako nosič pro přípravu proteinových vakcín. V experimentální části byl připraven plasmid kódující glykoprotein gp140 SOSIP P4W s připojenou peptidovou coiled-coil kotvou a peptidovými značkami potřebnými pro purifikaci a identifikaci rekombinantního proteinu. Aby mohly být tyto značky později odstraněny, byla mezi gp140 SOSIP + coiled coil sekvenci a pomocné značky přidána aminokyselinová sekvence rozpoznávána endoproteasou enterokinasou (EC 3.4.21.9). Fúzní protein byl exprimován v HEK 293F linii savčích buněk, a následně purifikován pomocí afinitní chromatografie. Po zakoncentrování byl protein štěpen enterokinasou za optimalizovaných podmínek. Výsledný glykoprotein gp140 SOSIP P4W s coiled coil kotvou byl charakterizován základními fyzikálně chemickými postupy.HIV, a human immunodeficiency virus, is a retrovirus that causes development of acquired immunodeficinecy syndrome AIDS. This disease and other HIV-related complicatons cost many people´s lives each year. The Master thesis summarize the development of HIV-1-preventing vaccine, followed by brief overview about recombinant proteins design, production, and purification. Next part describes the properties of HIV-1 envelope protein gp140 in soluble and structurally stabilized variant "SOSIP" from a patient "WEAU" in chronic stage of HIV-1 infection (designed as P4W). Last part of the introduction summarizes preparation and properties of liposome particles, which could be used as a carrier nanoparticles for recombinant proteins vaccines formulation. The experimental part describes the design of a plasmid coding for gp140 SOSIP P4W glycoprotein fused with a sequence for coiled-coil anchor and tags needed for purification and identification separated by sequence recognized by endoprotease enterokinase (EC 3.4.21.9). Next part describes expression of the recombinant protein in a mammalian cells line HEK 293F followed by purification using affinity chromatography. The purified protein was enzymatically cleaved under optimized conditions. The resulting gp 140 SOSIP P4W glycoprotein with coiled-coil motif was then characterized using physical-chemical methods.
Number of the records: 1