Number of the records: 1
Příprava a transformace protoplastů jednoděložných rostlin a jejich využití pro studium lokalizace proteinů cytokininového metabolismu
Title statement Příprava a transformace protoplastů jednoděložných rostlin a jejich využití pro studium lokalizace proteinů cytokininového metabolismu [rukopis] / Karolina Šenková Additional Variant Titles Příprava a transformace protoplastů jednoděložných rostlin a jejich využití pro studium lokalizace proteinů cytokininového metabolismu Personal name Šenková, Karolina (dissertant) Translated title Preparation and transformation of monocot protoplasts and their use for localization studies of cytokinin metabolism-related proteins Issue data 2016 Phys.des. 74 s. (134 258 znaků) : il., schémata, tab. + CD Note Ved. práce Ondřej Plíhal Oponent Olga Šamajová Another responsib. Plíhal, Ondřej (thesis advisor) Šamajová, Olga (opponent) Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor) Keywords protoplasty * transformace * subcelulární lokalizace * CKX * NRH * ALDH * Zea mays * protoplasts * transformation * subcellular localization * CKX * NRH * ALDH * Zea mays Form, Genre diplomové práce master's theses UDC (043)378.2 Country Česko Language čeština Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Mgr. Degree program Navazující Degree program Biochemie Degreee discipline Biochemie book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 00193687-443349310.pdf 36 1.9 MB 28.04.2016 Posudek Typ posudku 00193687-ved-575375722.pdf Posudek vedoucího 00193687-opon-189251935.pdf Posudek oponenta Call number Barcode Location Sublocation Info DP-KBC/257 (PřF-KBO) 3134520338 PřF-Holice PřF, Knihovna Holice - sklad In-Library Use Only
Genetické inženýrství zahrnuje jako nepostradatelný nástroj pro přípravu transgenních organismů metody genetické transformace. Konkrétně u rostlin jsou některé z nich díky své dostupnosti a robustnosti dobře zavedené a často využívané transformace zprostředkovaná Agrobacterium tumefaciens, biolistické metody či elektroporace. Další alternativní metody jsou využívány naopak méně transformace pomocí polyethylenglykolu, karbidu křemíku, liposomů nebo mikroinjekce. Cytokininy jsou významné rostlinné hormony mající mnoho funkcí a zajišťující nezbytné pochody při růstu a vývoji. Určení subcelulární lokalizace enzymů cytokininového metabolismu je důležité pro pochopení jejich funkce i vzájemné provázanosti. Cílem této práce bylo optimalizovat podmínky pro izolaci protoplastů z jednoděložných rostlin a jejich transientní transformaci s důrazem na zvýšení její účinnosti. Postup byl následně shrnut do přehledného protokolu. Tato metodika byla použita pro subcelulární lokalizaci vybraných enzymů cytokininového metabolismu: cytokinindehydrogenas, nukleosid-N-ribohydrolas a aldehyddehydrogenas ve fúzi s GFP pomocí laserového skenovacího konfokálního mikroskopu. Pro potvrzení signalizační funkce N-terminálních sekvencí vybraných isoforem ZmCKX byla provedena stabilní exprese v buněčné suspenzní kultuře A. thaliana Ler za použití GFP-fúzních konstruktů obsahujících deleci těchto předpokládaných signálních peptidů.Genetic engineering involves several methods of genetic transformation as a mean to obtain transgenic organisms. Some of them are due to their availability and robustness well established and frequently used Agrobacterium-mediated transformation, biolistic methods or electroporation. Alternative methods, for example PEG-mediated transformation, silicon carbide or liposome mediated transformation and microinjection are used less often. Cytokinins are important plant hormones playing key roles in numerous developmental and physiological processes. Determining their subcellular localization is important for understanding their function and possible interactions. The aim of this work is to optimize the conditions for protoplast isolation and their transient transformation with the emphasis on increasing the efficiency. The procedure was subsequently summarized in a several-step protocol. This methodology was used with the aim to study the subcellular localization of selected enzymes involved in cytokinin metabolism cytokinin dehydrogenases, nucleoside N-ribohydrolases and aldehyde dehydrogenases. All proteins were prepared as fusions with GFP and the localization was studied using laser scanning confocal microscopy. To confirm the signaling function of N-terminal sequence of selected ZmCKX isoforms, stable expression in A. thaliana Ler suspension culture using GFP-fusion constructs containing deletion of these predicted signal peptides was performed.
Number of the records: 1