Number of the records: 1  

Vývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning

  1. Title statementVývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning [rukopis] / Marek Kucej
    Additional Variant TitlesVývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning
    Personal name Kucej, Marek, (dissertant)
    Translated titleEngineering suspension HEK293OX stable cell lines for CRISPR-based screening
    Issue data2021
    Phys.des.81 : grafy, tab.
    NoteOponent Jiří Drábek
    Ved. práce David W Brighty
    Another responsib. Drábek, Jiří, 1969- (opponent)
    Brighty, David W, (thesis advisor)
    Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor)
    Keywords CRISPR/Cas * HEK293 * spCas9 * dCas9_VPR * CRISPR/Cas * HEK293 * spCas9 * dCas9_VPR
    Form, Genre diplomové práce master's theses
    UDC (043)378.2
    CountryČesko
    Languageangličtina
    Document kindPUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitleMgr.
    Degree programNavazující
    Degree programBiochemie
    Degreee disciplineBiochemie
    book

    book

    Kvalifikační práceDownloadedSizedatum zpřístupnění
    00234354-538675192.pdf01.5 MB31.12.2999
    PosudekTyp posudku
    00234354-ved-577083116.pdfPosudek vedoucího
    00234354-opon-558825055.pdfPosudek oponenta

    V tejto práci boli vyvinuté dve klonálne bunkové línie exprimujúce varianty proteínu Cas9: jedna bunková línia exprimujúca divoký typ spCas9, druhá exprimujúca dCas9_VPR fúzny proteín. Suspenzné HEK293OX bunky boli transdukované lentivírusovými časticami kódujúcimi použité dva transgény. Transdukované bunky boli selektované antibiotikom pre vytvorenie stabilného fondu. Stabilné fondy slúžili ako základ pre vytvorenie klonálnej bunkovej línie. Klonálne bunkové línie boli získané z jednotlivých buniek cez proces bunkového triedenia, výberu klonov a ich expanzie. U stabilných klonálnych línií bola úspešne preukázaná integrácia provírusu nesúceho transgén, expresia transgénu a jeho funkčnosť.In this thesis, two clonal cell lines expressing Cas9 protein variants were generated: one cell line expressing the wild type spCas9, another expressing dCas9_VPR fusion protein. Suspension HEK293OX cells were transduced with lentiviral particles encoding the two transgenes. Transduced cells underwent a selection process to generate a stable pool. Stable pools served as basis for clonal cell line generation. Clonal cell lines were obtained from single cells through single cell sorting, clone hitpicking and expansion. Stable clonal cell lines were successfully validated for transgene containing provirus integration, expression, and function.

Number of the records: 1  

  This site uses cookies to make them easier to browse. Learn more about how we use cookies.