Number of the records: 1
Exprese lidského alfa-3 beta-1 komplexu Na+/K+-ATPasy v kvasinkách Saccharomyces cerevisiae
Title statement Exprese lidského alfa-3 beta-1 komplexu Na+/K+-ATPasy v kvasinkách Saccharomyces cerevisiae [rukopis] / Veronika Kolomazníková Additional Variant Titles Exprese lidského alfa-3 beta-1 komplexu Na+/K+ - ATPasy v kvasinkách Saccharomyces cerevisiae Personal name Kolomazníková, Veronika (dissertant) Translated title Expression of human alpha-3 beta-1 complex of the Na+/K+ - ATPase in yeast Saccharomyces cerevisiae Issue data 2017 Phys.des. 65 Note Ved. práce Jaroslava Šeflová Oponent Miroslav Huličiak Another responsib. Šeflová, Jaroslava (thesis advisor) Huličiak, Miroslav (opponent) Another responsib. Univerzita Palackého. Centrum regionu Haná (degree grantor) Keywords Sodno-draselná pumpa * exprese * kvasinky * neurologické poruchy * Sodium-potasium pump * expression * yeast * neurologi-cal disorders Form, Genre bakalářské práce bachelor's theses UDC (043)378.22 Country Česko Language čeština Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Bc. Degree program Bakalářský Degree program Biochemie Degreee discipline Biotechnologie a genové inženýrství book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 00221649-567466706.pdf 54 2 MB 03.05.2017 Posudek Typ posudku 00221649-ved-372446255.pdf Posudek vedoucího 00221649-opon-292895916.pdf Posudek oponenta Call number Barcode Location Sublocation Info BP-KBC/205 (PřF-KBO) 3134520310 PřF-Holice PřF, Knihovna Holice - sklad In-Library Use Only
Cílem této bakalářské práce byla příprava lidského komplexu alfa-3 beta-1 Na+/K+-ATPasy v kvasinkách Sa-charomyces cerevisie. Na+/K+-ATPasa byla úspěšně připraven jako fúzní protein s histidinovou kotvou na N-konci podjednotky beta. Důležitými faktory pro pří-pravu membránových proteinů je složení kultivačního média, rozrušení buněčné membrány detergenty a doba solubilizace membrán. Jako účinnější se ukázala solubilizace 2 hodiny pomocí detergentů SDS a DDM. Nicméně, využití afinitní chromatografie vedlo ke značným ztrátám podjednotky alfa. Jako vhodnější metoda se ukázala purifikace s využitím diferenciální centrifugace založená na protokolu izolace Na+/K+-ATPasy z vepřových ledvin. Při úspěšné přípravě lidského alfa-3 beta-1 komplexu Na+/K+-ATPasy v aktivním stavu je možné studovat strukturní změny způsobené mutacemi v genu ATP1A3 kódující isoformu alfa-3, jejíž mutace zapříčiňují několik neurologických poruch.We expressed the human complex alpha-3 beta-1 of Na+/K+-ATPase in yeast cells Saccharomyces cerevisiae. The recombinant protein was expressed as the His-tag fusion protein, which was localised on the N-terminus of beta subunit. A crucial step in the purification of membrane proteins is their solubilisation with detergents. We identified the suitable detergents (malto-sides and SDS) and the incubation time for membrane solubilisation. Moreover, the considerable losses of the alpha subunit occurred during the affinity chromatography. According to these findings we decided to change the purification procedure. We used the analogous protocol for the isolation of the porcine kidney Na+/K+-ATPase. The preparation of Na+/K+-ATPase in yeast can be useful for the studies of mutation effects on the enzyme structure.
Number of the records: 1