Novák, David
Elektrochemická přeměna a analýza stability cytochromu c [rukopis] / David Novák. -- 2015. -- 62 : il., grafy, schémata + CD ROM. -- Oponent Jan Hrbáč. -- Ved. práce Jan Vacek. -- Abstract: Byl studován cytochrom c (cyt c) izolovaný z koňského a telecího srdce. Z obou vzorků byly připraveny apoformy, jenž byly následně podrobeny spolu s nativními cyt c elektrochemickým analýzám. Také byla studována jejich stabilita pomocí elektroforézy a Westernova přenosu. Eliminace hemu v případě apoforem byla potvrzena LC-MS analýzou. Elektroforéza na polyakrylamidovém gelu v přítomnosti denaturačního činidla prokázala, že nedochází k degradaci proteinu během izolace. Dále bylo prokázáno, že monoklonální (Ab A-8) a polyklonální (Ab H-104) protilátky se váží jak na nativní cyt c, tak i na strukturu apocytochromů. Při studiu redoxních vlastností byl identifikován redukční signál hemu (pík HM) i samotného proteinu (pík H), čímž bylo možné od sebe rozpoznat nativní cyt c od apocytochromů. Pík H apocytochromů byl podstatně vyšší než u nativních cyt c. Příčinou je denaturace apocytochromu a s tím spojené rozvolnění struktury, jenž bylo potvrzeno pomocí nativní elektroforézy na polyakrylamidovém gelu. Také byly pozorovány oxidační signály cyt c a apoforem při použití voltametrických metod. Předložené výsledky přispívají k pochopení redoxních vlastností konjugovaných proteinů. Mohou sloužit jako základ pro studium jejich struktury pomocí elektrochemických senzorů.. -- Abstract: Cytochromes c (cyt c) and their apoforms from bovine and equine heart were studied. Both cyt c native forms and apoforms were isolated and subjected to electrochemical analysis at carbon and Hg-containing electrodes. For the apoforms, the elimination of heme was confirmed by LC-MS and inevitable degradation of the samples during isolation was investigated by denaturing polyacrylamide gel electrophoresis together with protein identification by monoclonal (Ab A-8) and polyclonal (Ab H-104) antibodies. Using chronopotentiometry the reduction signal of heme (peak HM) and the signal of the protein moiety (peak H) were observed. The peak H of the apocytochrome forms was significantly higher than that of the native cyt c forms. The reason for this is that the apoforms of cyt c undergo a relaxation of their structure compared to the native proteins, which was confirmed by native polyacrylamide gel electrophoresis. In addition to this, both structural forms (native cyt c vs. apocyt c) also gave a different electrooxidation pattern using voltammetry. The results presented here could contribute to understanding the redox properties of conjugated proteins in general. They could also serve as a starting point for further studies on the structure and function of cytochromes using electrochemical sensors.
Hrbáč, Jan. Vacek, Jan. Univerzita Palackého. Katedra organické chemie
cytochrom c. elektrochemie. strukturní stabilita. redoxní vlastnosti. struktura. Westernův přenos. elektroforéza. cytochrome c. electrochemistry. structural stability. redox properties. western blot. electrophoresis. diplomové práce
(043)378.2