Protoplasty jsou potenciálně totipotentní buňky enzymaticky zbavené buněčné stěny, které si zachovávají schopnost dediferenciace. Dediferenciační procesy probíhají při vhodných podmínkách jejich kultivace, aplikací fytohormonů mohou protoplasty znovu vstoupit do buněčného cyklu, proliferovat a regenerovat. Protoplasty mají využití při biotechnologických manipulacích, které umožňují zdokonalovat genetickou informaci. V této práci byla sledována úspěšnost izolace a regenerace protoplastů z různých donorových materiálů kulturního hrachu Pisum sativum odrůdy Menhir a planě rostoucího hrachu Pisum jomardi. Kultury protoplastů byly dále použity k analýze úrovně exprese proliferačních genů PCNA (jaderný antigen proliferujících buněk) a RNR (ribonukleotid reduktáza). Oba tyto geny jsou zodpovědné za buněčnou proliferaci. Větší výtěžnosti, životnosti a dělení protoplastů bylo dosaženo u hrachu Pisum sativum odrůdy Menhir. Gen PCNA byl nejvíce exprimován v protoplastových kulturách odvozených z listů u Pisum sativum odrůdy Menhir, u hrachu Pisum jomardi byla exprese nízká v protoplastových kulturách odvozených z listů i kalusů. Pro gen RNR se nepodařilo optimalizovat metodiku jeho exprese z důvodu nespecifických primerů. Z výsledků této práce vyplývá, že gen PCNA může být považován za marker úspěšné proliferace.Protoplasts are potentially totipotent cells enzymatically stripped of cell walls which retain the ability of dedifferentiation. Dedifferentiation processes take place under suitable conditions for their cultivation, application of phytohormones protoplasts can reenter to the cell cycle, proliferate and regenerate. Protoplasts are useful for biotechnological manipulations which are possible to improve the genetic information. In this work, success isolation and regeneration of protoplasts from different donor material of pea Pisum sativum variety Menhir and wild pea Pisum jomardi was monitored. Protoplast cultures were also used for analysis gene expression levels of proliferative genes PCNA (proliferating cell nuclear antigen) and RNR (ribonucleotide reductase). Both of these genes are responsible for cell proliferation. Higher yield, viability and dividing of protoplasts were achieved in pea Pisum sativum variety Menhir. The level of expression PCNA was higher in protoplast cultures derived from leaves of Pisum sativum var. Menhir and low in protoplast cultures derived from leaves and callus of Pisum jomardi. It was failed to optimize the methodology of RNR expression due to non-specific primers. The results of this study show that PCNA gene can be considered a marker of successful proliferation.