Cílem práce bylo vytvoření citlivé metody na kvantifikaci tří dopingových látek a následné použití na reálném vzorku. Spojení kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie se ukázalo jako dobré řešení. Mezi nejdůležitější úkoly patřilo nalezení účinné mobilní fáze pro úspěšnou separaci. Výsledek pro kolonu Discovery plněnou oxidem zirkoničitým se skládal ze dvou složek: 5 mM ? kysel. 3,5 dinitrobenzoová s 5 % acetonitrilu (A) a acetonitril (B). Použitá eluce byla izokratická v poměru 70:30 A:B s průtokem 0,1 ml/min. Kalibrační model se skládal z připravených roztoků o koncentracích od 1 mg/l až po 25 mg/l. Determinační koeficient linearity křivek se pohyboval od 0,988 pro p hydroxyamfetamin, 0,996 pro metafetamin až po 0,998 pro efedrin. Meze detekce byly 0,77 mg/l pro efedrin, 1,04 mg/l pro metamfetamin a 1,89 mg/l pro p-hydroxyamfetamin. Mez kvantifikace pro EPH byl 1,13 mg/l, pro MET 1,54 mg/l a pro PHA 2,80 mg/l. Jako reálný vzorek byly použity 4 rostliny druhu Ephedra. Dvě z nich efedrin obsahovaly (Ephedra Sinica a Ephedra Americana) a byl kvantifikován, u další byl detekován, ale pod limitem kvantifikace (Ephedra Fragilis) a u Ephedra Likiangensis byl obsah efedrinu pod limitem detekce. U rodu Ephedra Sinica byl obsah stanoven na 811,37 ? 55,41 ppm v 1 g vzorku. U Ephedra Americana byl obsah efedrinu 78,00 ? 3,66 ppm v 1 g vzorku.The objective of this thesis is to create a simple method for quantification of three doping agents and use on a real sample. The hyphenation of liquid chromatography and mass spectrometry was found as suitable solution. The most important part was the founding of the operative mobile phase for separation. The result for column Discovery (filled with ZrO2) consisted 5 mM 3,5 dinitrobenzoic acid with 5 % of acetonitrile (A) and acetonitrile (B). Elution was izocratic A:B 70:30 with flow rate 0.1 ml/min. Calibration curve consisted of prepared solutions with concentrations from 1 mg/l to 25 mg/l. Coefficient of determination was 0.988 for p hydroxyamphetamine, 0.996 for metamphetamine and 0.998 for ephedrine. Limits of detection were 0.77 mg/l for EPH, 1.04 mg/l for MET and 1.89 mg/l for PHA. Limits of quantification were 1.13 mg/l for EPH, 1.54 mg/l for MET and 2.80 mg/l for PHA. There were 4 herbs Ephedra specie used as real samples. Two of them contained ephedrine (Ephedra Sinica and Ephedra Americana) and it was quantified. By the next one (Ephedra Fragilis), the amount of ephedrine was detected, but under the limit of detection and by the last one (Ephedra Likiangensis), the amount of ephedrine was under the limit of detection. Genus Ephedra Sinica contained 811.37 ? 55.41 ppm in 1 g of herb. Ephedra Americana contained 78.00 ? 3.66 ppm in 1 g of herb.