V experimentální části této práce je představena screeningová metoda pro dědičné metabolické poruchy (DMP) pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) s detekcí tandemovou hmotnostní spektrometrií (TMS). Jsou zde srovnány různé chromatografické podmínky použité v průběhu vývoje metody a uvedeny výsledky optimalizace TMS a validace konečné metody. Potenciální přínos pro diagnostiku DMP je ilustrován analýzou vzorků močí od pacientů se známými DMP, kontrolních močí a vzorků se standardním přídavkem látek charakteristických pro vybraná onemocnění. V teoretické části jsou ve stručnosti popsány techniky HPLC a TMS a krátce uvedeno téma dědičných metabolických poruch.A screening method for multiple inborn errors of metabolism by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (HPLC-TMS) is presented in the experimental part of this thesis. Several chromatographic conditions used during method development are compared and results of TMS optimisation and final method validation are shown. The potential for application in screening for inborn errors of metabolism (IEMs) is demonstrated by measurement of urines of patients with known IEMs, control urines and samples spiked with metabolites characteristic for selected IEMs. In the theoretical part the used techniques of HPLC and mass spectrometry are described and the topic of IEMs is briefly introduced.