Number of the records: 1  

Studium hypotetické cytokinindehydrogenasy bakterie Nostoc 7120

  1. Title statementStudium hypotetické cytokinindehydrogenasy bakterie Nostoc 7120 [rukopis] / Veronika Smékalová
    Additional Variant TitlesStudium hypotetické cytokinindehydrogenasy bakterie Nostoc 7120
    Personal name Smékalová, Veronika (dissertant)
    Translated titleStudy of a putative cytokinin dehydrogenase from bacteria Nostoc 7120
    Issue data2010
    Phys.des.78 s. (104 984 znaků) : il., grafy, tab. + 1 CD ROM
    NoteVed. práce Jitka Frébortová
    Another responsib. Frébortová, Jitka (thesis advisor)
    Takáč, Tomáš (opponent)
    Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor)
    Keywords ytokinindehydrogenasa * cytokininy * cyanobakterie * Cytokinin dehydrogenase * cytokinins * cyanobacteria
    Form, Genre diplomové práce master's theses
    UDC (043)378.2
    CountryČesko
    Languagečeština
    Document kindPUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitleMgr.
    Degree programNavazující
    Degree programBiochemie
    Degreee disciplineBiochemie
    book

    book

    Kvalifikační práceDownloadedSizedatum zpřístupnění
    82374-327556803.pdf46392.9 KB26.04.2010
    PosudekTyp posudku
    82374-ved-683526410.pdfPosudek vedoucího
    82374-opon-465632598.pdfPosudek oponenta
    Call numberBarcodeLocationSublocationInfo
    DP-KBC/148 (PřF-KBO)3134510401PřF-HolicePřF, Knihovna Holice - skladIn-Library Use Only

    V genomu cyanobakterie Nostoc 7120 byl identifikován gen hypotetické cytokinindehydrogenasy (CKX), enzymu ireverzibilně degradujícího rostlinné hormony cytokininy. Je známo, že cyanobakterie jsou považovány za předchůdce rostlinných chloroplastů a předpokládá se, že cytokininy mají na cyanobakterie podobný vliv jako na rostliny, co se týče vývoje a růstu. Cyanobakteriální gen NsCKX byl klonován z vektoru pQE 40 do vektoru pMAL-c4X a exprimován v Escherichia coli. Exprese byla detekována pomocí SDS-PAGE elektroforézy. Rekombinantní protein byl poté purifikován a také mutován pro získání enzymové aktivity. Ani v jednom případě však nebyla aktivita zaznamenána. Pro omezení možných chyb při skládání proteinu po jeho expresi byl mutovaný i nemutovaný gen NsCKX klonován do vektoru pMAL-p5X, který umožňuje expresi do periplasmy. Exprese cílového proteinu však nebyla detekována a enzymovou aktivitu se také nepodařilo zaznamenat. Podmínky exprese proto budou muset být optimalizovány. Otázka, zda identifikovaný gen skutečně kóduje jeden z důležitých enzymů účastnících se metabolismu cytokininů, tak zůstává stále nezodpovězena.A gene for a putative cytokinin dehydrogenase, an enzyme which degrades plant hormones cytokinins, was identified in a genome of cyanobacteria Nostoc 7120. It is generally agreed, that plant chloroplasts have developed from a cyanobacterial ancestor and that cytokinins may have similar function in development and growth in both cyanobacteria and plants. Cyanobacterial NsCKX gene was cloned from the pQE 40 vector into the pMAL-c4X vector and this recombinant vector was then expressed in Escherichia coli. Expression was detected by SDS-PAGE electrophoresis. Recombinant protein was then purified and also site-directed mutagenesis was performed to obtain enzyme activity. However, active protein was not obtained in any case. To reduce possible errors in protein folding after expression, wild-type and mutated genes were cloned into the pMAL-p5X vector that allows the expression into a periplasm. Neither expression of the target protein nor enzyme activity was detected. Expression conditions have to be further optimized. The question of whether the identified gene indeed encodes an important enzyme of cytokinin metabolism thus still remains unanswered.

Number of the records: 1  

  This site uses cookies to make them easier to browse. Learn more about how we use cookies.