Number of the records: 1
Protein modifications
Title statement Protein modifications [rukopis] / Lukáš Najdekr Additional Variant Titles Proteinové modifikace Personal name Najdekr, Lukáš (dissertant) Translated title Protein modifications Issue data 2011 Phys.des. 107 s. (131397 znaků) : il., grafy, schémata, tab. Note Ved. práce Marek Šebela Another responsib. Frömmel, Jan (opponent) Šebela, Marek, 1971- (thesis advisor) Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor) Keywords Aminoaldehyd dehydrogenasa 2 * MALDI * biotinylace * androgenní receptory * ARA70 * Aminoaldehyde dehydrogenase 2 * MALDI * biotinylation * androgen receptors * ARA70 Form, Genre diplomové práce master's theses UDC (043)378.2 Country Česko Language angličtina Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Mgr. Degree program Navazující Degree program Biochemie Degreee discipline Biochemie book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 82370-453998989.pdf 25 3.2 MB 03.05.2011 Posudek Typ posudku 82370-ved-562013410.pdf Posudek vedoucího 82370-opon-175143960.pdf Posudek oponenta Call number Barcode Location Sublocation Info DP-KBC/162 (PřF-KBO) 3134509717 PřF-Holice PřF, Knihovna Holice - sklad In-Library Use Only
Proteinové modifikace jsou velmi důležitou součástí jak v přírodě tak i v laboratoři. Spousta moderních vědeckých metod je založena na proteinových modifikacích. Biotinylace je jednou z nejběžnějších modifikací používaných v afinitní chromatografii pro purifikaci a imobilizaci proteinů. V této práci byla biotinylována aminoaldehyd dehydrogenása z hrachu setého(Pisum Sativum) pomocí reakčního činidla Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin. S pomocí MALDI-TOF-MS byla úspěšně určena poloha pěti modifikaci (LCLC-biotinu) v proteinové struktuře AMADH2.Biotinylace měla značný dopad na enzymatickou aktivitu AMADH2, která byla zredukována na 16% aktivity nemodifikované AMADH2. Druhá část této práce byla věnována studiu modifikací využívaných při purifikaci proteinů. Androgenní receptory, které patří mezi skupinu nukleárních receptorů, byli cílovou skupinou pro studium těchto modifikací. Konkrétně bylo pracováno s koregulátorem androgeních receptorů 70 (ARA70) a byla provedena příprava ARA70 1-170 pro měření retgenovou krystalografii. Pro tvorbu tohoto proteinu bylo využito tří rozdílných expresních vektorů ? pDEST15, pDEST17 a pDESTHisMBP. Pro separaci ARA70 ze směsi proteinů bylo využito His-Trap kolon a konečné purifikace byly prováďeny s pomocí iontově výměnné chromatografie. Nakonec protein ARA70 1-170 byl úspěšně vyprodukován a purifikován jako vzorek pro rentgenovou krystalografii.Protein modifications are very important in the nature and in the laboratory. Many modern scientific methods are based on artificial protein modifications. Biotinylation is one of the most common modification used in affinity chromatography for purification and immobilization. In this thesis, aminoaldehyde dehydrogenase 2 from Pisum Sativum was biotinylated by using the Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin reagent.Using MALDI-TOF-MS, localization of five LC-LC-biotins was successfully determined in the protein structure of AMADH2. Biotinylation had significant impact on AMADH2 activity which was reduced to 16% of activity of non-modified AMADH2. In the second part of this thesis, modifications necessary for protein purification were studied. In detail, androgen receptor-associated co-regulator 70 (ARA70) and its preparation for X-ray crystallography was studied. Three different expression vectors were used for its production ? pDEST15, pDEST17 and pDEST-HisMBP. For separation, His-Trap column was used and for the final purification ion exchange chromatography was performed. Finally, part of the ARA70 1-170 was purified and prepared for further analysis and crystallization conditions screening.
Number of the records: 1