Number of the records: 1  

Role malých Ran GTPáz v acentrozomálních rostlinných buňkách

  1. Title statementRole malých Ran GTPáz v acentrozomálních rostlinných buňkách [rukopis] / Lenka Binarová
    Additional Variant TitlesRole malých Ran GTPáz v acentrozomálních rostlinných buňkách
    Personal name Binarová, Lenka (dissertant)
    Translated titleThe role of small RanGTPases in acentrosomal plant cells
    Issue data2009
    Phys.des.76 s. : il., tab.
    NoteVed. práce Pavla Binarová
    Another responsib. Binarová, Pavla (thesis advisor)
    Hašek, Jiří (opponent)
    Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra buněčné biologie a genetiky (degree grantor)
    Keywords RanBPM * AtRanBPM * Ran GTPázy * gamma-tubulin * mikrotubuly * cytoskelet * acentrozomální rostlinná buňka * RanBPM * AtRanBPM * Ran GTPases * gamma-tubulin * microtubules * cytoskeleton * acentrosomal plant cell
    Form, Genre diplomové práce master's theses
    UDC (043)378.2
    CountryČesko
    Languagečeština
    Document kindPUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitleMgr.
    Degree programNavazující
    Degree programBiologie
    Degreee disciplineMolekulární a buněčná biologie
    book

    book

    Kvalifikační práceDownloadedSizedatum zpřístupnění
    60162-373864646.pdf11.8 MB31.12.2999
    Call numberBarcodeLocationSublocationInfo
    DP-KBB/017 (PřF-KBO)3134510515PřF-HolicePřF, Knihovna Holice - skladIn-Library Use Only

    Malé GTPázy (GTP vazebné proteiny) regulují v eukaryotických buňkách mnoho procesů, jako např. proliferaci buněk, organizaci cytoskeletu, přenos signálu a další. Jsou to proteiny, fungující jako molekulární přepínače, cyklující mezi GTP aktivním a GDP inaktivním stádiem. Jejich cyklus je tedy spojen s navázáním a hydrolýzou GTP. U živočišných buněk jsou mikrotubuly nukleovány z MTOC (mikrotubuly organizujících center), což je obvykle centrozóm. Rostlinné buňky jsou však acentrozomální a mikrotubuly jsou organizovány z disperzních MTOC. Ran GTPázy jsou důležité pro organizaci mikrotubulů a organizaci mitotického vřeténka a též pro acentrozomální nukleaci mikrotubulů. O jejich roli v tomto procesu u vyšších rostlin, které představují důležitý model acentrozomální nukleace mikrotubulů, se zatím mnoho neví. V rámci diplomové práce byl částečně charakterizován vybraný protein Ran GTPázové dráhy - rostlinný homolog proteinu RanBPM-AtRanBPM z Arabidopsis thaliana. Práce byla prováděna v Laboratoři rostlinného cytoskeletu a buněčného cyklu na Ústavu experimentální botaniky AV ČR v Olomouci v rámci řešení grantových projektů. Prvním krokem práce bylo vyklonování celého genu AtRanBPM a jeho dvou domén LisH a SPRY. Gateway technologií byl gen AtRanBPM a jeho domény překlonovány do expresních vektorů pro GFP fúze. Transientní exprese AtRanBPM proteinu a jeho domén bylo dosaženo metodou particle bombardmentu a metodou transformace rostlin tabáku Agrobacteriem nesoucím příslušné konstrukty. Domény i celý protein AtRanBPM vykazovaly v obou systémech pro transientní expresi difúzní signál přítomný v jádře a cytoplazmě. Dálším krokem byla transformace suspenzí Arabidopsis thaliana konstruktem nesoucím celý gen AtRanBPM. Podařilo se odvodit stabilní kulturu, která exprimovala AtRanBPM protein. Ten byl přítomen v jádře interfázních buněk a také v cytoplazmatických provazcích a v mitotických buňkách v oblasti mitotického vřeténka. Tato lokalizace byla potvrzena i technikou nepřímé imunofluorescence, která rovněž umožnila sledovat kolokalizaci AtRanBPM proteinu s gamma-tubulinem a s mikrotubuly v interfázních i mitotických buňkách. Získané výsledky naznačily možnou roli proteinu AtRanBPM, který náleží k proteinům Ran GTPázové dráhy, v organizaci cytoskeletu v buňkách vyšších rostlin.Small GTPases are regulators of numerous processes such as signal transduction, cell proliferation and organization of cytoskeleton in eukaryotic cells. Small GTPases work as molecular switches, which are cycling between active and inactive states. Their function is thus dependent on the periodical association or dissociation of GTP. Microtubules are nucleated from MTOC which is represented by centrosom in animal. Nevertheless, plant cells are acentrosomal lacking discrete site for microtubule nucleation and microtubules are organized from disperse MTOC. Ran GTPases that belong to Ras superfamily are important for organization of microtubules, mitotic spindle as well as for acentrosomal nucleation of microtubules. Although higher plant cell present an important model for acentrosomal microtubules nucleation, role of Ran GTPases in the process remains to be elucidated. The AtRanBPM protein-Arabidopsis thaliana homologue of mammalian RanBPM GTPase was characterized in the frame of this diploma thesis. At first the cloning of AtRanBPM gene and its LisH and SPRY domains was performed using Gateway technology. Subsequently the gene was transferred to the destination vectors for plant expression of GFP fusions. The tobacco cells were transformed with AtRanBPM constructs using two different experimental approaches: particle bombardment or Agrobacterium transfection. Observation of cells with transient expression of entire gene and its LisH and SPRY domains revealed localization similar pattern; GFP proteins were observed both in nucleus and in cytosol. Next, A. thaliana suspension cultures were transformed with AtRanBPM gene. The stable lines expressing AtRanBPM have been established and localization of GFP fusion proteins was analysed in vivo. In interphase we observed a localization of AtRanBPM in nuclei and cytoplasm. GFP-AtRanBPM localized with mitotic spindle in metaphase and anaphase. The localization pattern was confirmed using in-direct immunofluorescence staining, that also enable to analyze co localization of AtRanBPM with gamma-tubulin and microtubules. The data presented here suggested possible role for AtRanBPM protein in microtubular cytoskeleton organization in acentrosomal higher-plant cells.

Number of the records: 1  

  This site uses cookies to make them easier to browse. Learn more about how we use cookies.