Tato diplomová práce je věnována mitogenem aktivované protein kináze 2 (MMK2) u vojtěšky seté (Medicago sativa L.), která má zásadní význam v celosvětovém zemědělství. Vojtěška hraje důležitou roli zejména v krmivářství, ale také jako meziplodina nebo například expresní systém pro terapeutické proteiny. MMK2 je důležitým článkem signálních drah zapojených v odpovědi vojtěšky na biotický a abiotický stres. Studium těchto vysoce konzervovaných signálních drah má význam pro udržitelné zemědělství a optimální produkci hospodářských plodin. V této práci byly charakterizovány transgenní linie vojtěšky seté se změněnou expresí genu MMK2 metodou kvantitativní PCR v reálném čase. Abundance fúzního proteinu GFP-MMK2 byla analyzována pomocí nativní polyakrylamidové elektroforézy a western blotu. Byla provedena lokalizace GFP-MMK2 s využitím konfokální laserové skenovací mikroskopie v kontrolních podmínkách a při ošetření houbovým elicitorem chitinem. Transgenní linie byly zběžně charakterizovány také na úrovni fenotypu a byla provedena diferenciální proteomická analýza. U transgenních linií s nadexpresí MMK2 pod 35S promotorem byla zjištěna vysoká míra exprese tohoto genu, vysoká abundance proteinu GFP-MMK2 a vyšší intenzita jeho fluorescence na pletivové a buněčné úrovni. Všechny tyto parametry byly nižší u transgenních linií s nadexpresí MMK2 pod ubikvitinovým promotorem. U tří nadexpresních linií se současným potlačením exprese MMK2 mechanismem RNA interference bylo pozorováno významné snížení exprese MMK2 oproti příslušným kontrolním liniím. Na úrovni fenotypu byly trangsenní linie oproti kontrole menšího vzrůstu, měly kratší internodia, pravděpodobně více listů a rozvětvené listové odnože. Identifikované proteiny diferenciálního proteomu linií 35S::GFP:MMK2, UBQ::GFP:MMK2, RSY-MMK2i-364 a UBQ::MMK2i-364 se dle ,,gene ontology" (GO) anotace účastnily genové exprese, proteosyntézy a procesů spojených s fotosyntézou. Lokalizace proteinů z diferenciálního proteomu byla předpovězena v chloroplastech, dalších plastidech, mitochondriích a buněčných membránách.This thesis focuses on mitogen-activated protein kinase 2 (MMK2) in alfalfa (Medicago sativa L.), a plant of major importance in global agriculture. Alfalfa plays an important role especially in the forage industry, but also as an intercrop or, for example, as an expression system for therapeutic proteins. MMK2 is a key component of signalling pathways involved in the response of alfalfa to both biotic and abiotic stresses. The study of these highly conserved signalling pathways is essential for promoting sustainable agriculture and optimizng crop production. In this work, transgenic alfalfa lines with altered MMK2 gene expression were characterized by real-time quantitative PCR. The abundance of the GFP-MMK2 fusion protein was analyzed by native polyacrylamide electrophoresis and western blotting. The localization of GFP-MMK2 was examined by confocal laser scanning microscopy under control conditions and during treatment with the fungal elicitor chitin. The transgenic lines were also evaluated at the phenotypic level, and differential proteomic analysis was performed. Transgenic lines overexpressing MMK2 under the 35S promoter exhibited a high level of MMK2 gene expression, an elevated abundance of the GFP-MMK2 protein and a higher fluorescence intensity at both the tissue and cellular level. All these parameters were lower in transgenic lines overexpressing MMK2 under the ubiquitin promoter. In three overexpression lines with simultaneous suppression of MMK2 expression by RNA interference mechanism, a considerable reduction of MMK2 expression was observed compared to the respective control lines. At the phenotypic level, the transgenic lines exhibited reduced stature compared with the control lines, had shorter internodes, presumably more leaves, and branched leaf offshoots. According to gene ontology (GO) annotation, the identified differential proteome proteins of lines 35S::GFP:MMK2, UBQ::GFP:MMK2, RSY-MMK2i-364 a UBQ::MMK2i-364 were involved in gene expression, proteosynthesis and processes related to photosynthesis. Localization of differential proteome proteins was predicted in chloroplasts, other plastids, mitochondria and cell membranes.