Sféroidy představují 3D model vhodný pro studium interakcí mezi buňkami a testování účinků léčiv, který poskytuje fyziologicky relevantnější prostředí ve srovnání s tradičními 2D kulturami. Cílem této práce bylo vytvořit monokultury sféroidů z buněčné linie kolorektálního karcinomu HCT116 (a jejích mutantních variant) a vyhodnotit účinek lymfocytů (kontrolní lymfocyty, CuET-ošetřené lymfocyty, IL-2-ošetřené lymfocyty) na růst a životaschopnost sféroidů pomocí fluorescenční mikroskopie a měření ATP pomocí kitu CellTiter-Glo. Dále bylo cílem studie vytvořit kokultury sféroidů z buněčné linie HCT116 a normální linie kolonických fibroblastů CCD18-Co a posoudit synergický účinek vybraných kombinací léčiv na molekulární úrovni pomocí western blot analýzy. Výsledky ukázaly, že IL-2-ošetřené lymfocyty vykazovaly nejvyšší cytotoxicitu, zejména u buněčných linií s funkčním nebo částečně funkčním p53. Nejefektivnější kombinací léčiv byl irinotekan:cisplatina v poměru 4:1, následovaný kombinací 5-fluorouracil:cisplatina v poměru 1:1. Metoda tvorby sféroidů na agarózou potažených destičkách, spolu s optimalizovanými analytickými technikami, poskytuje slibnou platformu pro vývoj nových terapeutických přístupů.Spheroids represent a 3D model suitable for studying cell interactions and testing drug effects, providing a more physiologically relevant environment compared to traditional 2D cultures. The aim of this work was to create monocultures of spheroids from the colorectal carcinoma cell line HCT116 (and its mutant variants) and evaluate the effect of lymphocytes (control lymphocytes, CuET-treated lymphocytes, IL-2-treated lymphocytes) on spheroid growth and viability using fluorescence microscopy and ATP measurement with the CellTiter-Glo kit. Additionally, the study aimed to establish cocultures of spheroids from the HCT116 cell line and the normal colon fibroblast line CCD18-Co and assess the synergistic effect of selected drug combinations at the molecular level using western blot analysis. The results showed that IL-2-treated lymphocytes exhibited the highest cytotoxicity, particularly in cell lines with functional or partially functional p53. The most effective drug combination was irinotecan:cisplatin at a ratio of 4:1, followed by 5-fluorouracil:cisplatin at a ratio of 1:1. The method of spheroid formation on agarose-coated plates, along with optimized analytical techniques, provides a promising platform for the development of new therapeutic approaches.