Number of the records: 1  

Metody detekce replikační aktivity lidských buněk a standardizace jejich použití pro analýzu buněčného cyklu

  1. Title statementMetody detekce replikační aktivity lidských buněk a standardizace jejich použití pro analýzu buněčného cyklu [rukopis] / Anna Kabotová
    Additional Variant TitlesMetody detekce replikační aktivity lidských buněk a standardizace jejich použití pro analýzu buněčného cyklu
    Personal name Kabotová, Anna, (dissertant)
    Translated titleMethods of determination of replicational activity of human cells and standardization of their use for the analysis of the cell cycle
    Issue data2021
    Phys.des.72
    NoteVed. práce Anna Ligasová
    Oponent Karel Koberna
    Another responsib. Ligasová, Anna, (thesis advisor)
    Koberna, Karel, (opponent)
    Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra buněčné biologie a genetiky (degree grantor)
    Keywords Replikace DNA * modifikované nukleosidy a nukleotidy * buněčný cyklus * imunofluorescence * obrazová cytometrie * DNA replication * modified nucleosides and nucleotides * cell cycle * immunofluorescence * image cytometry
    Form, Genre bakalářské práce bachelor's theses
    UDC (043)378.22
    CountryČesko
    Languagečeština
    Document kindPUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitleBc.
    Degree programBakalářský
    Degree programBiologie
    Degreee disciplineMolekulární a buněčná biologie
    book

    book

    Kvalifikační práceDownloadedSizedatum zpřístupnění
    00252357-313241842.pdf341.3 MB07.05.2021
    PosudekTyp posudku
    00252357-ved-244787187.pdfPosudek vedoucího
    00252357-opon-660499111.pdfPosudek oponenta

    Předkládaná práce poskytuje přehled několika metod používaných pro detekci replikační aktivity buněk s využitím modifikovaných nukleosidů (5-bromo-2´-deoxyuridinu, BrdU a 5-etynyl-2´-deoxyuridinu, EdU) a nukleotidu (biotin-16-deoxyuridin-5´-trifosfátu). Součástí práce je porovnání těchto metod s ohledem na možnost provedení následné analýzy buněčného cyklu, na sílu poskytovaného signálu a na jejich vliv na fluorescenci fluorescenčních proteinů. Sledované metody byly testovány na pěti lidských buněčných liniích. Výsledky ukázaly, že z testovaných metod byl pro analýzu replikační aktivity a současně analýzu buněčného cyklu buněk nejvhodnější nukleosid EdU, který je detekován klikací reakcí. Naopak nejméně vhodnou metodou bylo použití BrdU v kombinaci s jeho odhalením ve struktuře DNA pomocí 4 N HCl. Tento způsob vedl k denaturaci DNA, což znemožnilo následnou analýzu buněčného cyklu. Pro současnou lokalizaci fluorescenčních proteinů byla nejvhodnější metoda založená na BrdU a působení nukleáz.The thesis presented provides a review of several methods used for the detection of cellular replicational activity by modified nucleosides (5-bromo-2´-deoxyuridine, BrdU and 5- ethynyl-2´-deoxyuridine, EdU) and nucleotide (biotin-16-deoxyuridine-5´-triphosphate). A part of the thesis concerns the comparison of these approaches with respect to the possibility of subsequent cell cycle analysis, the signal strength and their impact on the fluorescence of the fluorescence proteins as well. The investigated methods were tested on five human cell lines. The results showed that nucleoside EdU detected by click reaction was the most suitable nucleoside for analysis of replicational activity and the concurrent cell cycle analysis. On the other hand, the least suitable approach represents the use of BrdU in combination with its revelation in DNA structure by 4 N HCl. This method led to the DNA denaturation making impossible the subsequent analysis of the cell cycle. Method based on BrdU and nucleases treatment emerged as the most convenient for the simultaneous analysis of fluorescent proteins.

Number of the records: 1  

  This site uses cookies to make them easier to browse. Learn more about how we use cookies.