Karboanhydráza (CA) je enzym nacházející se ve většině živých organismů, kde plní funkci regulace pH. Katalyzuje reakci hydratace CO2 na hydrogenuhličitan. Lidská forma má 16 izoforem a je přítomna ve všech tkáních těla. Některé izoformy jsou charakteristické pro různá onemocnění. To z enzymu dělá výborný terapeutický cíl. Inhibitory CA jsou používány pro léčbu glaukomu, obezity, epilepsií nebo rakoviny. V této práci byla vyvíjena metoda pro stanovení aktivity enzymu - CA II. Pro tento účel byla použita kolorimetrická a fluorescenční metoda. Pouze fluorescenční metoda byla zavedena do podmínek HTS. Metoda byla validována pomocí komerční knihovny LOPAC 1280 a poté pomocí fluorescenční metody bylo otestováno 5120 látek unikátní chemické knihovny ÚMTM na inhibitory - CA II.Carbonic anhydrase (CA) is an enzyme found in most of living organisms, where it regulates pH. CA catalyzes the hydration of CO2 forming bicarbonate. Human form has 16 isoforms and is present in all body tissues. Some isoforms are specific for various diseases. That makes the enzyme an excellent therapeutic target. CA inhibitors are used for treating glaucoma, obesity, seizures or cancer. In this thesis a method for measuring activity of - CA II was developed. Colorimetric and fluorescent method were used for this purpose. Only fluorescent method was implemented in the HTS environment. The method was validated by using commercial chemical library LOPAC 1280. Then the method was used to test 5120 compounds of unique chemical library of ÚMTM for - CA II inhibitors.