Number of the records: 1
Studium lokalizace cytokininového receptoru CRE1/AHK4 pomocí fluorescenčně značeného cytokininu
Title statement Studium lokalizace cytokininového receptoru CRE1/AHK4 pomocí fluorescenčně značeného cytokininu [rukopis] / Karolina Kubiasová Additional Variant Titles Funkční studie cytokininových receptorů a jejich lokalizace pomocí fluorescenčního značení Personal name Kubiasová, Karolina (dissertant) Translated title Functional studies on cytokinin receptors and their localization using fluorescent labeling Issue data 2020 Phys.des. 181 + CD Note Ved. práce Ondřej Plíhal Another responsib. Plíhal, Ondřej (thesis advisor) Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor) Keywords cytokininy * cytokininové receptory * CRE1/AHK4 * histidin kinasy * fluorescenční značení * konfokální mikroskopie * percepce cytokininů * GFP * NBD * Arabidopsis thaliana * endoplasmatické retikulum * plasmatická membrána * brefeldin A * cytokinins * cytokinin receptors * CRE1/AHK4 * histidine kinases * fluorescent labelling * confocal microscopy * cytokinin perception * GFP * NBD * Arabidopsis thaliana * endoplasmic reticulum * plasma membrane * brefeldin A Form, Genre disertace dissertations UDC (043.3) Country Česko Language angličtina Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Ph.D. Degree program Doktorský Degree program Biochemie Degreee discipline Biochemie book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 00196453-919012114.pdf 36 18.2 MB 06.10.2020 Posudek Typ posudku 00196453-opon-374016237.pdf Posudek oponenta 00196453-ved-530905369.pdf Posudek vedoucího 00196453-opon-998922534.pdf Posudek oponenta Průběh obhajoby datum zadání datum odevzdání datum obhajoby přidělená hodnocení typ hodnocení 00196453-prubeh-389997656.pdf 01.09.2011 06.10.2020 10.12.2020 S 2
Cytokininy jsou rostlinné hormony, které hrají důležitou roli v mnoha růstových a vývojových procesech rostlin. V Arabidopsis thaliana se nachází tři transmembránové histidin kinasy, které fungují jako cytokininové receptory, konkrétně AHK2, AHK3 a CRE1/AHK4. Výsledky subcelulární lokalizace receptorů navrhovaly endoplasmatické retikulum (ER) jakožto hlavní místo cytokininové percepce, zatímco studium cytokininového transportu ukazovalo na plasmatickou membránu (PM) jako místo cytokininové signalizace. Pro lepší pochopení dynamiky lokalizace cytokininových receptorů v buňce byla připravena řada fluorescenčních prób. Vlastnosti prób odvozených od isopentenyladeninu (iP) byly stanoveny v bakteriálním receptorovém testu, kde byla sledována kompetice mezi fluorescenčně značeným cytokininem a radioaktivně značeným trans-zeatinem. Přestože strukturní změny fluorescenční proby vedly většinou k výrazným ztrátam biologické aktivity, několik fluorescenčních derivátů se vázalo dobře. Jeden z nich (iP-NBD) byl vybrán jako nástroj pro vizualizaci cytokininových receptorů v buňce. Pomocí detailní studie subcelulární lokalizace fluorescenčně značeného cytokininu a ARABIDOPSIS HISTIDINE KINASE 4 (CRE1/AHK4) receptoru sfuzovaného s GFP reporterem bylo ukázáno, že ER-lokalizované cytokininové receptory vstupují do sekreční dráhy až k PM v buňkách kořenového apikálního meristému a k buněčné desce dělících se meristematických buněk. Byl tak poskytnut upravený pohled na signalizaci cytokininů a možnost různých míst percepce na PM a ER.Cytokinins are plant hormones that play an essential role in various aspects of plant growth and development. In Arabidopsis thaliana three transmembrane histidine kinases, namely AHK2, AHK3 and CRE1/AHK4, serve as cytokinin receptors. Subcellular localization of the receptors proposed the endoplasmic reticulum (ER) membrane as a principal cytokinin perception site, while the study of cytokinin transport pointed to the plasma membrane (PM)-mediated cytokinin signalling. To gain better insight into the dynamics of cytokinin receptor localization within the cell a series of cytokinin fluorescent probes were developed. The ligand properties of isopentenyladenine (iP)-derived probes were assessed in a bacterial receptor test where the competition of a cytokinin fluoroprobe with radiolabelled trans-zeatin was measured. Although the structural changes within the fluorescent probes led mostly to a significant loss of the biological activity, several fluorescent derivatives interacted well. The most promising of them (iP-NBD) was selected as a tool for visualization of the cytokinin receptor pool inside the cell. By detailed monitoring subcellular localizations of the fluorescently labelled natural cytokinin probe and the receptor ARABIDOPSIS HISTIDINE KINASE 4 (CRE1/AHK4) fused to GFP reporter, it is shown that pools of the ER-located cytokinin receptors can enter the secretory pathway and reach the PM in cells of the root apical meristem, and the cell plate of dividing meristematic cells. A revised view on cytokinin signalling and the possibility of multiple sites of perception at PM and ER is provided.
Number of the records: 1