Fytohormony jsou významné regulační látky klíčové pro správný růst a vývoj rostlin. V rámci předložené bakalářské práce byla vyvinuta metoda pro souběžné stanovení cytokininů, auxinů, abscisátů, jasmonátů a kyseliny salicylové. Metoda využívá extrakci cílových látek z rostlinného materiálu pomocí 10% methanolu okyseleného 5 % kyseliny mravenčí. Toto extrakční činidlo dosahovalo dobré extrakční účinnosti analytů při současné nízké extrakci pigmentů. Pro izolaci fytohormonů z komplexní rostlinné matrice byla vybrána metoda extrakce na tuhé fázi. Testovány byly sorbenty se smíšeným mechanismem zadržování analytů v konvenčních kolonách anebo v miniaturizované uspořádání StageTip (STop And Go Extraction Tip). U obou purifikačních metod bylo dosaženo dobrých návratností pro většinu analytů z vybraných fytohormonálních skupin. Na závěr byla optimalizovaná metoda využívající jednokrokový izolační protokol založený na špičkách pipet plněných sorbenty použita při stanovení profilu rostlinných hormonů ve vybraných vývojových stádiích huseníčku rolního (Arabidopsis thaliana).Phytohormones are signal molecules, which play an important role in controlling growth and developmental processes in plants. In this bachelor thesis, a new method for simultaneous determination of endogenous levels of cytokinins, auxins, abscisates, jasmonates and salicylic acid has been developted. For sample extraction, 10% methanol acidified with 5 % of formic acid was used with a high extraction efficiency and low yield of plant pigments. Solid-phase extraction was employed to isolate plant hormones from in the complex matrices of plant tissue samples. For sample purification, mixed mode conventional columns and StageTip (STop And Go Extraction Tip) technology were tested. Both isolation approaches showed sufficient recovery of all target compounds. Finally, optimized one-step purification protocol based on pipet tips filled with sorbents were used to profile selected plant hormones and their metabolites in 4-, 7-, 10- and 14-day-old Arabidopsis thaliana seedlings.