Number of the records: 1
Studium aktivního místa aldehyddehydrogenasy 2A z mechu Physcomitrella patens
Title statement Studium aktivního místa aldehyddehydrogenasy 2A z mechu Physcomitrella patens [rukopis] / Tereza Libigerová Additional Variant Titles Studium aktivního místa aldehyddehydrogenasy 2A z mechu Physcomitrella patens Personal name Libigerová, Tereza (dissertant) Translated title Study on the active site of aldehyde dehydrogenase 2A from moss Physcomitrella patens Issue data 2018 Phys.des. 68 Note Ved. práce David Kopečný Oponent David Zalabák Another responsib. Kopečný, David (thesis advisor) Zalabák, David (opponent) Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor) Keywords Aldehyddehydrogenasa 2A * Physcomitrella patens * metabolismus aldehydů * mutageneze * enzymová kinetika * Aldehyde dehydrogenase 2A * Physcomitrella patens * aldehyde metabolism * mutagenesis * enzyme kinetics Form, Genre diplomové práce master's theses UDC (043)378.2 Country Česko Language čeština Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Mgr. Degree program Navazující Degree program Biochemie Degreee discipline Biochemie book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 00221614-479765917.pdf 0 3.7 MB 31.12.2999 Posudek Typ posudku 00221614-ved-607587595.pdf Posudek vedoucího 00221614-opon-127059178.pdf Posudek oponenta
Tato diplomová práce se zabývá studiem aktivního místa aldehyddehydrogenasy 2A (ALDH2A) z mechu Physcomitrella patens. Teoretickou část tvoří rešerše znalostí o mechu P. patens, nadrodině rostlinných aldehyddehydrogenas, rodině rostlinných aldehyddehydrogenas 2 a metabolismu aldehydů. V praktické části byla provedena místně-řízená mutageneze genu PpALDH2A, exprese mutantů v Escherichia coli a purifikace rekombinantních proteinů afinitní chromatografií. U všech rekombinantních variant PpALDH2A byla ověřena sekundární struktura a teplotní stabilita. Dále byla studována jejich substrátová specificita k vybraným alifatickým a aromatickým aldehydům. Pro dva nejvýznamnější substráty byly změřeny saturační křivky a určeny hodnoty Km, Vlim a katalytická účinnost (Vlim/Km). Ve výsledcích je diskutován význam jednotlivých aminokyselinových reziduí v aktivním místě enzymu.The diploma thesis is focused on a study of the active site of aldehyde dehydrogenase 2A from moss Physcomitrella patens. The theoretical part summarizes the knowledge of the moss P. patens, plant aldehyde dehydrogenase superfamily, plant aldehyde dehydrogenase from family 2 and metabolism of aldehydes. The practical part is aimed at site-directed mutagenesis of PpALDH2A gene, mutant expression in Escherichia coli and purification of recombinant proteins by affinity chromatography. Secondary structure and thermal stability of recombinant variants of PpALDH2A were verified. Moreover, substrate specificity towards aliphatic and aromatic aldehydes was studied. Saturation curves for the two most significant substrates were measured and kinetic parameters Km, Vlim and a catalytic efficiency (Vlim/Km) were determined. A significance of the individual amino acid residues in the active site of enzyme is discussed in results.
Number of the records: 1