Práce se zabývá problematikou klinického významu a kvantitativního stanovení vitaminu D v krvi. Význam testování vitaminu D v krevní cirkulaci se zvyšuje celosvětově a koreluje s nedávnými výzkumy prokazujícími pozitivní korelaci mezi deficitem vitaminu D a metabolickými chorobami, imunodeficiencí a dalšími nemocemi. Stávající testy pro stanovení 25-OH vitaminu D postrádají srovnatelnost s kandidátní referenční metodou, což způsobuje obtíže při diagnostice a monitorování vitaminu D. Předkládaná práce srovnávala výkonnost 2 automatizovaných imunoanalytických metod a 1 kapalinové chromatografie s UV detekcí. Práce je členěna na teoretickou a praktickou část. V teoretické části jsou zpracovány základy metabolismu vitaminu D a interpretace základních pojmů souvisejících s daným tématem. Praktická část kombinuje popis použitých diagnostických souprav a analytických systémů. Získaná data byla zpracována pomocí statistického programu MedCalc.The present work deals clinical significance and determination of vitamin D in the blood. The importance of vitamin D in the blood circulation is increasing worldwide and correlates with the recent studies showing positive correlation between vitamin D insufficiency and metabolic diseases, immunodeficiency and other diseases. Current assays for the determination of 25-hydroxyvitamin D lack comparability with a candidate reference method, causing difficulties in diagnosis and monitoring of vitamin D deficiency. The study compared the performance of 2 automated immunoassays and 1 liquid chromatographic method with UV detection. The work is divided into theoretical and practical part. The theoretical part presents the basics of vitamin D metabolism and interpretation of the basic concepts related to the topic. The practical part includes a description of laboratory tests and used analyzers. The obtained laboratory data were processed by statistical programme MedCalc.