Hlavním tématem této diplomové práce bylo nalezení optimálních podmínek pro další studium fytoekdysteroidů (PECs). Modelovou rostlinou se v této práci stal špenát setý, u něhož bylo snahou vyvinout vhodnou metodu kultivace. Z použitých technik se ukázalo být nadějné pěstování na perlitu. V rámci této práce bylo potvrzeno, že s postupujícím vývojem rostliny hladiny testovaných PECs klesají a biosyntéza je zahájena nejspíš až v pozdějších stádiích vývoje. Dále bylo skrínováno 19 různých kultivarů špenátu pro obsah PECs. S ohledem na poměrně vysoké hladiny PECs a největší úspěšnost pěstování, byly nejlépe hodnoceny japonské kultivary Wakakusa, Flaylander a New Japan. Hladiny PECs byly stanoveny pomocí metody UHPLC-MS/MS. V rámci této práce byla navíc vyvinuta metoda stanovení obsahu těchto látek pomocí SFC-UV-MS, kterou byly změřeny některé reálné vzorky. Posledním dílčím cílem byla izolace chloroplastů z pletiv špenátu a následná kvantifikace PECs v těchto organelách. V souvislosti s tím bylo také provedeno ověření čistoty získané frakce imunodetekční metodou.The main aim of this thesis was appearance of optimal conditions for further study of phytoecdysteroids (PECs). Plant model became spinach in this diploma and was an effort to optimize of method of cultivation. Growing on perlite seemed suitable techniques, how effectively to get sufficient quantity of plant material. Experiments in this work confirmed, that levels of PECs decrease during early development of spinach. PECs were also screened in 19 varieties of spinach. Japanese cultivars Wakakusa, Flaylander and New Japan were evaluated positively for their relatively high levels of PECs and for success of their cultivation. Levels of PECs were determined using UHPLC-MS/MS and for analysis the compounds was also developed a method SFC-UV-MS, through which were measure some real samples. The last step was to isolated chloroplasts from spinach tissues and quantification PECs in these organelles. In this context was verified of purify of the chloroplast fraction by immunodetection method.