Number of the records: 1
Vliv vybraných ATP-kompetitivních inhibitorů mTOR kinázy na signalizaci aryluhlovodíkovým receptorem (AhR)
Title statement Vliv vybraných ATP-kompetitivních inhibitorů mTOR kinázy na signalizaci aryluhlovodíkovým receptorem (AhR) [rukopis] / Karolína Poulíková Additional Variant Titles Vliv vybraných ATP-kompetitivních inhibitorů mTOR kinázy na signalizaci aryluhlovodíkovým receptorem (AhR) Personal name Poulíková, Karolína (dissertant) Translated title The effect of selected ATP-competitive inhibitors of mTOR kinase on the signalization of aryl hydrocarbon receptor (AhR) Issue data 2017 Phys.des. 60 : grafy, schémata, tab. + CD ROM Note Oponent Zdeněk Dvořák Ved. práce Radim Vrzal Another responsib. Dvořák, Zdeněk (opponent) Vrzal, Radim (thesis advisor) Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra buněčné biologie a genetiky (degree grantor) Keywords Cytochrom P450 * biotransformace * mTOR * rapamycin * posttranslační modifikace * ATP-kompetitivní inhibitory mTOR kinázy * INK 128 * AZD2014 * OSI-027 * Cytochrome P450 * biotransformation * mTOR * rapamycin * posttranslational modification * ATPcompetitive inhibitors of mTOR * INK 128 * AZD2014 * OSI-027 Form, Genre diplomové práce master's theses UDC (043)378.2 Country Česko Language čeština Document kind PUBLIKAČNÍ ČINNOST Title Mgr. Degree program Navazující Degree program Biologie Degreee discipline Molekulární a buněčná biologie book
Kvalifikační práce Downloaded Size datum zpřístupnění 00214219-908980151.pdf 171 1.5 MB 28.04.2017 Posudek Typ posudku 00214219-ved-260597284.pdf Posudek vedoucího 00214219-opon-368502548.pdf Posudek oponenta Call number Barcode Location Sublocation Info DP-KBB/192 (PřF-KBO) 3134520384 PřF-Holice PřF, Knihovna Holice - sklad In-Library Use Only
Aryluhlovodíkový receptor (AhR) je ligandy aktivovaný transkripční faktor zodpovědný za regulaci exprese enzymů metabolizujících xenobiotika. Aktivita tohoto receptoru je ovlivňována vazbou ligandu a posttranslačními modifikacemi, především fosforylací. V bakalářské práci jsem ukázala, že inhibice serin/threoninové kinázy mTOR látkou rapamycinem potencuje signalizaci AhR v přítomnosti ligandu. Signální dráha mTOR je zodpovědná za velké množství nitrobuněčných procesů jako jsou proliferace, apoptóza či organizace buněčného cytoskeletu. Deregulace této dráhy je spojená s procesem karcinogeneze, tudíž se její inhibice stala nadějí léčby nádorových onemocnění. V diplomové práci byl zkoumán vliv duálních ATP-kompetitivních inhibitorů mTOR kinázy, INK 128, AZD2014 a OSI-027, na signalizaci AhR v přítomnosti jeho ligandů v buněčné linii HepG2 odvozené od hepatocelulárního karcinomu. Nejprve byly určeny netoxické koncentrace testovaných látek metodou MTT a následně stanoveny inhibiční účinky na komplexy mTORC1/C2 metodou Western blotting. Úroveň aktivity AhR byla detekovaná metodou Gene reporter assay a enzymová aktivita CYP1A1 metodou EROD. Hladina CYP1A1 mRNA byla stanovena metodou real-time PCR. Bylo zjištěno, že komplex mTORC2 není za daných podmínek v buněčné linii aktivován, tudíž nebylo možné prokázat duální účinek inhibitorů. Kombinace testovaných látek s aktivátorem AhR 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxinem (TCDD) potencovala transkripční aktivitu AhR a expresi CYP1A1 mRNA v závislosti na zvyšující se koncentraci látek. Byla také pozorována indukce katalytické aktivity CYP1A1, která ovšem s rostoucí koncentrací testovaných látek klesala. Samotné inhibitory mTOR neměly vliv na hladinu CYP1A1 mRNA, enzymovou aktivitu CYP1A1 ani na aktivitu AhR. Tato práce ukázala, že ATP-kompetitivní inhibitory mTOR kinázy potencují účinek aktivace AhR ligandem dioxinem a že mTOR signální dráha ovlivňuje regulaci AhR.Aryl hydrocarbon receptor (AhR) is a ligand-activated transcription factor involved in regulation of xenobiotic-metabolizing enzymes. It is activated by ligands or posttranscriptional modifications, especially phosphorylation. In my bachelor thesis, I found that serine/threonine-specific protein kinase mTOR affected dioxin-inducible AhR-dependent CYP1A1 expression in the presence of mTOR inhibitor, rapamycin. AhR regulator which affects its signaling in the presence of ligands. mTOR signaling pathway is responsible for a large number of intracellular processes such as proliferation, apoptosis and cytoskeletal organization. Deregulation of this pathway is associated with a carcinogenesis and its inhibition can be considered as a cancer treatment. This thesis focuses on the influence of ATP-competitive inhibitors of mTOR, namely INK 128, AZD2014 and OSI-027, on signalisation mediated by the AhR in HepG2 cell line derived from hepatocellular carcinoma. Firstly, the non-toxic concentrations of the substances were determined by MTT method and then the inhibitor's effects on complexes mTORC1/C2 by Western blotting. The level of AhR activity was detected by Reporter gene assay and the enzymatic aktivity of CYP1A1 by EROD method. CYP1A1 mRNA levels were monitored by real-time PCR. Complex mTORC2 is not activated in the cell line under these condition. Therefore a dual effect of inhibitors was not proved. The substances were tested itself and in the combination with 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD). The TCDD-inducible level of CYP1A1 mRNA and transcriptional activity of AhR were increased in the presence of mTOR inhibitors in dose-dependent manner. The induction of TCDD-inducible catalytic activity of CYP1A1 was also observed. However, it was decreased in dose-dependent manner of tested substances. mTOR inhibitors itself had no effect on CYP1A1 mRNA, CYP1A1 enzyme activity and AhR activity. The results suggest that ATP-competitive inhibitors of mTOR potentiate effect of AhR signaling activation in the presence of its ligand dioxin and that mTOR affects AhR signalling.
Number of the records: 1