Cílem bakalářské práce bylo zkonstruovat citlivý amperometický biosenzor na stanovení laktózy. Laktóza, jako analyt, byla zvolena z důvodu neustále se zvyšujícího procenta lidí trpících laktózovou intolerancí. Za použití chronoamperometrie byl nalezen nejcitlivější biosenzor, který byl následně testován na vzorku mléka, tvarohu, jogurtu a sušeného mléka. Jako referenční metoda byla zvolena plynová chromatografie s hmotnostně spektrometrickou detekcí.The aim of the thesis was to construct a sensitive amperometric biosensor for the determination of lactose. Lactose, as analyte, was chosen because of the constantly increasing percent of people who suffers from lactose intolerance. The most sensitive biosensor was found using chronoamperometry and subsequently tested on a sample of milk, cheese, yoghurt and milk powder. Gas chromatography with mass spectrometry was chosen as a reference method.