Vzhledem k plánovanému rozšíření novorozeneckého screeningu v roce 2015 bylo cílem práce vyvinout druhostupňovou HPLC-MS/MS metodu, která by umožňovala potvrzení vybraných dědičných metabolických poruch. Byla vyvinuta a validována metoda, kterou je možno stanovit v suché krevní skvrně methionin, homocystein a cystathionin, což jsou důležité markery poruch metabolismu methioninu a kobalaminů. Dále jsou do metody zahrnuty methylmalonát a methylcitrát, jejichž stanovení může být v rámci selektivního screeningu využito pro diagnostiku methylmalonové acidurie a propionové acidemie. Metoda byla aplikována na vzorky pacientů s diagnostikovanou metabolickou poruchou a na více než 500 krevních skvrn novorozenců, ze kterých byla stanovena referenční rozmezí pro jednotlivé analyty.Regarding to the planned extension of the newborn screening in 2015, the aim of the work was to develop 2nd tier HPLC-MS/MS method that would enable the confirmation of selected inherited metabolic diseases. A method was developed and validated, it can be used for determination of methionine, homocysteine and cystathionine in dried blood spot. These metabolites are important markers of disorders in methionine and cobalamine metabolism. Methylmalonate and mehylcitrate are also included in the method, their determination can be used for methylmalonic aciduria and propionic academia diagnosis within selective screening. Method was applied to patients' samples and also more than 500 newborns' dried blood spots and the reference ranges were established.