Epilepsie je neurologické onemocnění, které se projevuje řadou poruch nervové činnosti, z nichž nejmarkantnější jsou epileptické záchvaty. První volbou léčby epilepsie je farmakoterapie antiepileptiky. Snahou je výrazně snížit nebo zcela vyloučit výskyt epileptických záchvatů. Nezbytným předpokladem úspěšné farmakoterapie je terapeutické monitorování těchto léčiv. Terapeutické monitorování antiepileptik je důležité z mnoha důvodu, a to hlavně při zahájení léčby, při periodické kontrole, při podezření na pokles účinnosti farmakoterapie, na toxicitu, na nedostatečné dávkování nebo na non-compliance a při změně dávkování či antiepileptika. Cílem je optimalizace dávkování léčiva s ohledem na individualizaci léčby a minimalizaci nežádoucích projevů. Předložená diplomová práce se zabývá vývojem, optimalizací a validací HPLC-ESI-MS-MS metod pro identifikaci a kvantifikaci sedmi antiepileptik (topiramátu, levetiracetamu, gabapentinu, vigabatrinu, clobazamu, clonazepamu a diazepamu) a třech aktivních metabolitů diazepamu (nordiazepamu, oxazepamu a temazepamu) v lidském séru. Tyto metody jsou velmi jednoduché, ekonomické a časově nenáročné na přípravu vzorku, analýzy jsou dostatečně rychlé. Dále byla ověřena linearita studovaných metod a prokázána jejich vysoká selektivita a specifičnost. Preciznost, přesnost a citlivost metod plně dostačuje potřebám klinické laboratoře. Tyto zavedené metody jsou součástí rutinní praxe na Úseku instrumentálních metod Laboratoří AGEL a.s. v Novém Jičíně.The epilepsy is a neurological disease that manifests in a variety of disorders of the nervous activities which are noticeable seizures. The first choice of treatment is the pharmacotherapy with antiepileptic drugs. The effort of pharmacotherapy is to significantly reduce or fully eliminate seizures. The therapeutic drug monitoring is required for a successful phramacotherapy. Therapeutic monitoring of antiepileptic drugs is important for many reasons, especially when starting treatment, in periodical examination, for suspected decrease of drug efficacy, toxicity, insufficient dosage or non-compliance and when changing dosage or antiepileptic drug. The aim is to optimize the dosage of the drug with consideration on an individual approach and minimizing adverse events. This present thesis deals with the development, optimization and validation of HPLC-ESI-MS-MS methods for the identification and quantitation of seven antiepileptic drugs (topiramate, levetiracetam, gabapentin, vigabatrin, clobazam, clonazepam and diazepam) and three active metabolites of diazepam (nordiazepam, oxazepam and temazepam) in human serum. These methods are rapid and simple, economical and time saving for sample pretreatment. Furthermore, a linearity of methods were verified and their high selectivity and specificity were demonstrated. Precision, accuracy and sensitivity of developed methods are fully sufficient in accordance with clinical laboratory practice. These established methods are currently in clinical practice use at the Department of Instrumental Methods, AGEL Laboratories in Nový Jičín.