Number of the records: 1  

Biochemická charakterizace enzymopatií způsobujících vrozené hemolytické anémie

  1. Title statementBiochemická charakterizace enzymopatií způsobujících vrozené hemolytické anémie [rukopis] / Pavla Pospíšilová
    Additional Variant TitlesBiochemická charakterizace enzymopatií způsobujících vrozené hemolytické anémie
    Personal name Pospíšilová, Pavla (dissertant)
    Translated titleBiochemical diagnosis of congenital hemolytic anemias associated with red blood cell enzymopathies
    Issue data2012
    Phys.des.106 s. (1 s.) 148900 znaků
    NoteVed. práce Dagmar Pospíšilová
    Oponent Vladimír Divoký
    Ved. práce Renáta Mojzíková
    Another responsib. Pospíšilová, Dagmar, 1956- (consultant)
    Divoký, Vladimír (opponent)
    Mojzíková, Renáta (thesis advisor)
    Another responsib. Univerzita Palackého. Katedra biochemie (degree grantor)
    Keywords hemolytická anémie * enzymopatie * PK * G6PD * hemolytic anemia * enzymopathies * PK * G6PD
    Form, Genre diplomové práce master's theses
    UDC (043)378.2
    CountryČesko
    Languagečeština
    Document kindPUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitleMgr.
    Degree programNavazující
    Degree programBiochemie
    Degreee disciplineBiochemie
    book

    book

    Kvalifikační práceDownloadedSizedatum zpřístupnění
    00140094-772236324.pdf501.7 MB23.04.2012
    PosudekTyp posudku
    00140094-ved-160001843.pdfPosudek vedoucího
    Call numberBarcodeLocationSublocationInfo
    DP-KBC/190 (PřF-KBO)3134512578PřF-HolicePřF, Knihovna Holice - skladIn-Library Use Only

    Enzymopatie, genetické onemocnění vyznačující se vrozenými abnormalitami enzymů červených krvinek, jsou jednou z příčin vzniku vrozené nesferocytární hemolytické anémie (HNSHA). Mezi nejrozšířenější z nich patří defekt glukosa-6-fosfátdehydrogenasy (G6PD) a pyruvátkinasy (PK). Základní diagnostické testy sice umožňují určit pravděpodobnou příčinu anémie, ale nejsou schopny rozlišit jednotlivé enzymovýmé defekty. Přesná diagnóza je tak určena až na základě snížené aktivity daného enzymu s následnou molekulárně-genetickou analýzou. Zavedli jsme screeningové metody, které mohou přispět k rozlišení mezi jednotlivými skupinami enzymopatií vedoucími k hemolytické anémii (HA). Tyto metody zahrnují stanovení koncentrace oxidovaného a redukovaného glutathionu (defekt glutathionového metabolismu erytrocytu), ADP a ATP (nedostačující glykolýza) prostřednictvím HPLC-MS/MS a spektrofotometrického stanovení poměru pyrimidinových a purinových bází určujícího deficit enzymu pyrimidin-5´-nukleotidasy. Dále jsme zoptimalizovali metodiky stanovení aktivity 11 enzymů, jejichž defekt může vést k HNSHA s různou četností výskytu. Analýzy byly aplikovány u 12 pacientů s podezřením na HA způsobenou erytrocytární enzymopatií. U 5 pacientů byla prokázána snížená aktivita PK (nedostatečnost glykolýzy se projevila rovněž sníženým poměrem ATP/ADP) a u 2 snížená aktivita G6PD. Diagnóza byla definitivně potvrzena prokázáním kauzální mutace v genu PKLR (1594C>T, 1529G>A, 1456C>T, 878A>T) a G6PD (647T>A, G844C). Mutace 878A>T a 647T>A nebyly dosud v literatuře popsány.Hereditary nonspherocytic hemolytic anemias (HNSHA) are associated with specific erythrocyte enzymopathies, which are defined as genetic disorders characterised by inherited abnormality of one of erythrocyte enzymes. The most common enzymopathies are glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) and pyruvate kinase (PK) deficiencies. Routine diagnostic tests enable to determine a presumable cause of anemia but do not distinguish among enzyme defects. It is only the direct enzyme activity assay followed by molecular genetic characterisation that allow diagnosis of erythroenzymopathies. We established screening methods such as HPLC-MS/MS determination of reduced and oxidised glutathione or ADP and ATP concentrations, which are useful for identification of either glutathione metabolism or glycolysis enzymopathies, and spectrophotometric monitoring of purine and pyrimidine erythrocyte pools, which characterise pyrimidine-5´-nucleotidase deficiency. Further, we optimised enzyme activity assays for characterisation of 11 enzyme defects leading to HNSHA with different frequency. We analysed 12 patients with suspected enzymopathies causing hemolytic anemia. Five patients had low PK activity with decreased ATP/ADP ratio (insufficient glycolysis) and two patients had reduced G6PD activity. The diagnosis (enzyme deficiency) was finally confirmed by identification of mutations in PKLR (1594C>T, 1529G>A, 1456C>T, 878A>T) and G6PD genes (647T>A, G844C). Mutations 878A>T and 647T>A have not yet been reported in the literature.

Number of the records: 1  

  This site uses cookies to make them easier to browse. Learn more about how we use cookies.