Tato práce se zaměřuje na analýzu 2-methylthio cytokininů v bakteriálních médiích. Hlavními cíly této práce bylo vyvinout dostatečně účinný purifikační protokol pro stanovení hladin těchto derivátů v biologickém materiálu a zrychlení HPLC-MS metody identifikace a kvantifikace 2MeS cytokininů. V této práci byl navržen purifikační protokol využívající klasickou SPE extrakci pro médium a buňky Nostoc a médium Rhodoccocus fascians. Jako alternativa k tomuto postupu byla využita také purifikace pomocí monolitických kapilár naplněných kopolymerem 2-akrylamido-2-methyl-1-propansulfonové kyseliny a ethylendimethakrylátu (AMPS-co-EDMA). Dále byly identifikovány a kvantifikovány 2MeS cytokininy v médiu Nostoc, Rhodoccocus fascians a WT a IPT mutantu Streptomyces turgidiscabies pomocí HPLC/MS/MS. Ke zrychlení HPLC/MS/MS metody byl využit systém reverzních fází a hydrofilní interakční chromatografie. Pokusy urychlit analýzu 2MeS cytokininů ovšem ztroskotali na nemožnosti separovat izomery 2MeScZR a 2MeStZR v systému reverzních fází a na nulové retenci 2MeSiPR při využití HILIC chromatografie.This work focuses on the analysis of 2-methylthio cytokinins in bacterial media. The main objectives of this work were to develop a sufficiently effective purification protocol for determinating the levels of these derivatives in biological material and acceleration of HPLC/MS method for the identification and quantification of 2MeS cytokinins. This work designed purification protocol using conventional SPE extraction for purification of medium Rhodoccocus fascians and the cells and medium Nostoc. As an alternative to this procedure was also used purification using monolithic capillaries filled with poly(2-acrylamido-2-methyl-1-propanesulfonic acid-co-ethylene dimethacrylate)(AMPS-co-EDMA). We also identified and quantified 2MeS cytokinins in the medium Nostoc, Rhodoccocus fascians and WT and IPT mutant of Streptomyces turgidiscabies using HPLC / MS / MS. For acceleration of HPLC-MS method the system of reverse phases and hydrophilic interaction chromatography were used. Attempts to accelerate the analysis of 2MeS cytokinins crashed on the impossibility of separating isomers 2MeScZR and 2MeStZR in the reverse phase system and on zero retention of 2MeSiPR using HILIC chromatography.