Počet záznamů: 1  

Fluorescenční detekce molekulárních interakcí Na+/K+-ATPázy

  1. Údaje o názvuFluorescenční detekce molekulárních interakcí Na+/K+-ATPázy [rukopis] / Kateřina Šmídová
    Další variantní názvyFluorescenční detekce molekulárních interakcí Na+/K+-ATPázy
    Osobní jméno Šmídová, Kateřina (autor diplomové práce nebo disertace)
    Překl.názFluorescence detection of the Na+/K+-ATPase molecular interactions
    Vyd.údaje2009
    Fyz.popisVIII + 59 stran : grafy, tab.
    PoznámkaVed. práce Martin Kubala
    Dal.odpovědnost Kubala, Martin, 1977- (vedoucí diplomové práce nebo disertace)
    Panáček, Aleš, 1978- (oponent)
    Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra experimentální fyziky (udelovatel akademické hodnosti)
    Klíč.slova Na+/K+ATPáza * C45 * fluorescein * zhášení fluorescence * TCSPC * heterologní exprese v E.coli * Na+/K+-ATPase * C45 * fluorescein * quenching of fluorescence * TCSPC * heterologous overexpresion in E.Coli
    Forma, žánr diplomové práce master's theses
    MDT (043)378.2
    Země vyd.Česko
    Jazyk dok.čeština
    Druh dok.PUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitulMgr.
    Studijní programNavazující
    Studijní programFyzika
    Studijní oborBiofyzika
    kniha

    kniha

    Kvalifikační práceStaženoVelikostdatum zpřístupnění
    54070-247129509.pdf29816.4 KB30.04.2009
    PosudekTyp posudku
    54070-ved-740361471.docPosudek vedoucího
    54070-opon-509678611.docPosudek oponenta

    Tato práce poskytuje všeobecný přehled o struktuře, funkci a fyziologickém významu sodno-draselné pumpy a dále stručný přehled některých metabolitů a xenobiotik ovlivňujících aktivitu Na+/K+-ATPázy. Cílem této diplomové práce bylo sledovat molekulární interakce Na+/K+-ATPázy s fluoresceinem, proto je zde také věnována kapitola fluoresceinu, jeho chemickým a spektrálním charakteristikám, jeho možnému užití např. v medicíně a také jeho několika analogům, které byly již v souvislosti s Na+/K+-ATPázou zkoumány. Experimenty probíhaly jednak na celé Na+/K+-ATPáze, ale i na její izolované velké cytoplasmatické kličce (C45). Z tohoto důvodu je zde detailněji popsána příprava této kličky, což zahrnuje heterologní expresi v Escherichia coli a následnou purifikaci získaného proteinu. Pro zkoumání interakce mezi fluoresceinem a sodno-draselnou pumpou bylo využito měření kinetiky dohasínání fluorescence metodou korelovaného čítání fotonů (TCSPC) a dále měření zhášení steady-state fluorescence. Výsledky měření zhášení fluorescence nenaznačují, že by zde k vazbě docházelo, ale měření kinetik dohásínání poskytlo výsledky, které danou interakci dokazují. Mimo to výsledky také umožňují rozlišit jednotlivé konformační stavy enzymu v přítomnosti různých ligandů a ukazují na významnou odlišnost konformace enzymu v přítomnosti ATP bez Mg2+. To potvrzuje hypotézy publikované v práci [Gryčová a kol. 2009], které byly vysloveny na základě experimentů s izolovanou velkou cytoplazmatickou kličkou.This thesis provides overall survey of a structure, function and physiological importance of sodium-potassium pump and also a summary of some metabolits and xenobiotics that affect the activity of Na+/K+-ATPase. The aim of this thesis was to study molecular interactions of Na+/K+-ATPase with fluorescein, and therefore there is one chapter focused on the chemical and spectral characteristics of fluorescein and its use in medicine. The chapter also deals with some of the fluorescein analogues that have already been examined in the connection to Na+/K+-ATPase. The experiments were conducted on the entire Na+/K+-ATPase, as well as on its isolated large cytoplasmic segment C45. Therefore preparation of C45 is described in more detail, which involves heterologous overexpresion in Escherichia coli and subsequent purification of the protein. For the examination of fluorescein and sodiumpotassium pump interaction, measurement of the fluorescence decay by the timecorrelated single photon counting (TCSPC) technique and steady-state measurement of the fluorescence quenching were used. The results of steady-state measurement quenching of fluorescence do not prove the binding of the fluorescein to the Na+/K+-ATPase, but the measurement of TCSPC does. Moreover, the results also enable to distinguish individual conformational states of the enzym in the presence of various ligands and indicate a significant distinction of the conformation in the presence of ATP without Mg2+. It confirms hypotheses published in the [Gryčová et al. 2009], which were stated on the basis of experiments with isolated large cytoplasmic segment C45.

Počet záznamů: 1  

  Tyto stránky využívají soubory cookies, které usnadňují jejich prohlížení. Další informace o tom jak používáme cookies.