Kucej, Marek,
Vývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning [rukopis] / Marek Kucej. -- 2021. -- 81 : grafy, tab. -- Oponent Jiří Drábek. -- Ved. práce David W Brighty. -- Abstrakt: V tejto práci boli vyvinuté dve klonálne bunkové línie exprimujúce varianty proteínu Cas9: jedna bunková línia exprimujúca divoký typ spCas9, druhá exprimujúca dCas9_VPR fúzny proteín. Suspenzné HEK293OX bunky boli transdukované lentivírusovými časticami kódujúcimi použité dva transgény. Transdukované bunky boli selektované antibiotikom pre vytvorenie stabilného fondu. Stabilné fondy slúžili ako základ pre vytvorenie klonálnej bunkovej línie. Klonálne bunkové línie boli získané z jednotlivých buniek cez proces bunkového triedenia, výberu klonov a ich expanzie. U stabilných klonálnych línií bola úspešne preukázaná integrácia provírusu nesúceho transgén, expresia transgénu a jeho funkčnosť.. -- Abstrakt: In this thesis, two clonal cell lines expressing Cas9 protein variants were generated: one cell line expressing the wild type spCas9, another expressing dCas9_VPR fusion protein. Suspension HEK293OX cells were transduced with lentiviral particles encoding the two transgenes. Transduced cells underwent a selection process to generate a stable pool. Stable pools served as basis for clonal cell line generation. Clonal cell lines were obtained from single cells through single cell sorting, clone hitpicking and expansion. Stable clonal cell lines were successfully validated for transgene containing provirus integration, expression, and function.
Drábek, Jiří, 1969-. Brighty, David W,. Univerzita Palackého. Katedra biochemie
CRISPR/Cas. HEK293. spCas9. dCas9_VPR. CRISPR/Cas. HEK293. spCas9. dCas9_VPR. diplomové práce
(043)378.2