Klásková, Jana
Proteomické přístupy ke studium cytokinin-vazebného proteinu z obilovin [rukopis] / Jana Klásková. -- 2010. -- 97 s : il. -- Ved. práce Ivo Chamrád. -- Abstrakt: Cytokininy jsou rostlinné hormony, které jsou zahrnuty do regulace mnoha důležitých procesů v rostlinném růstu a vývoji. V minulosti bylo vynaloženo hodně úsilí do výzkumu těhto významných molekul, i přesto však zůstaly některé otázky nedořešeny. Mezi ně bezpochyby také spadá role cytokinin-vazebných proteinů. Jedním z nejvíce prostudovaných proteinů této skupiny je cytokinin-vazebný protein z pšeničného embrya (CBF-1). CBF-1 je trimerní protein vykazující vysokou afinitu k aromatickým cytokininům. Na základě jeho chování během embryogeneze a klíčení se předpokládá, že reguluje hladiny N6-benzyladeninu a jeho derivátů. Hlavním cílem diplomové práce bylo sledování dynamiky CBF-1 během klíčení použitím různých proteomických metod. Těmi byly jak moderní techniky hmotnostní spektrometrie zastoupené metodou multiple reaction monitoring, tak ?klasické? proteomické metody jako dvojdimenzionální elektroforéza. Ta byla ve spojení s Western blotem a detekcí CBF-1 specifickou protilátkou vybrána jako nezávislý postup vhodný pro kontrolu dosažených výsledků. Mimo to byl sledován také vývoj vyzebné kapacity proteinů pro cytokininy, a to pomocí rovnovážné dialýzy. Získané výsledky naznačují snížení hladiny CBF-1 během čtyř dnů klíčení na polovinu její původní hodnoty. Tyto výsledky jsou však v rozporu s již dříve publikovanými informacemi a vnáší do problematiky CBF-1 nové otázky.. -- Abstrakt: Cytokinins are plant hormones involved in regulation of many important processes in plant growth and development. Notwithstanding much effort have been made into research of these important molecules, several outstanding issues connected with them have still remained. Undoubtedly, one of them is the exact function of cytokinin-binding proteins. One of the most examined members of this protein family is wheat cytokinin-binding protein 1 (CBF-1). CBF-1 was published to be embryo-specific trimeric protein having remarkable affinity for aromatic cytokinins. Based on its behaviour during embryogenesis and germination, CBF-1 has been assumed to act as a regulator of N6-benzlyadenin-type cytokinin levels. The main aim of our work was to revise CBF-1 dynamics upon cereal seed germination using advanced proteomic methods. For this purpose, target proteomic approach utilizing mass spectrometry and selected reaction monitoring was used. Then, classical two-dimensional electrophoresis followed by imunodetection of CBF-1 was applied as an independent proteomic tool suitable for verifying of achieved results. Simultaneously, cytokinin-binding activity was monitored employing equilibrium dialysis. Surprisingly, data obtained from these experiments indicate that the level of CBF-1 falls to the half of ist original value within first four days of germination. This finding is in contrast to information published earlier and sheds brand new light on this interesting protein.
Chamrád, Ivo. Šebela, Marek, 1971-. Univerzita Palackého. Katedra biochemie
Cytokinin-vazebný protein z pšeničného embrya. cytokininy. proteomické metody. Cytokinin-binding protein from wheat germ. cytokinins. proteomics approaches. diplomové práce
(043)378.2