Počet záznamů: 1
Studium aktivního místa aldehyddehydrogenasy 2A z mechu Physcomitrella patens
Údaje o názvu Studium aktivního místa aldehyddehydrogenasy 2A z mechu Physcomitrella patens [rukopis] / Tereza Libigerová Další variantní názvy Studium aktivního místa aldehyddehydrogenasy 2A z mechu Physcomitrella patens Osobní jméno Libigerová, Tereza (autor diplomové práce nebo disertace) Překl.náz Study on the active site of aldehyde dehydrogenase 2A from moss Physcomitrella patens Vyd.údaje 2018 Fyz.popis 68 Poznámka Ved. práce David Kopečný Oponent David Zalabák Dal.odpovědnost Kopečný, David (vedoucí diplomové práce nebo disertace) Zalabák, David (oponent) Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra biochemie (udelovatel akademické hodnosti) Klíč.slova Aldehyddehydrogenasa 2A * Physcomitrella patens * metabolismus aldehydů * mutageneze * enzymová kinetika * Aldehyde dehydrogenase 2A * Physcomitrella patens * aldehyde metabolism * mutagenesis * enzyme kinetics Forma, žánr diplomové práce master's theses MDT (043)378.2 Země vyd. Česko Jazyk dok. čeština Druh dok. PUBLIKAČNÍ ČINNOST Titul Mgr. Studijní program Navazující Studijní program Biochemie Studijní obor Biochemie kniha
Kvalifikační práce Staženo Velikost datum zpřístupnění 00221614-479765917.pdf 0 3.7 MB 31.12.2999 Posudek Typ posudku 00221614-ved-607587595.pdf Posudek vedoucího 00221614-opon-127059178.pdf Posudek oponenta
Tato diplomová práce se zabývá studiem aktivního místa aldehyddehydrogenasy 2A (ALDH2A) z mechu Physcomitrella patens. Teoretickou část tvoří rešerše znalostí o mechu P. patens, nadrodině rostlinných aldehyddehydrogenas, rodině rostlinných aldehyddehydrogenas 2 a metabolismu aldehydů. V praktické části byla provedena místně-řízená mutageneze genu PpALDH2A, exprese mutantů v Escherichia coli a purifikace rekombinantních proteinů afinitní chromatografií. U všech rekombinantních variant PpALDH2A byla ověřena sekundární struktura a teplotní stabilita. Dále byla studována jejich substrátová specificita k vybraným alifatickým a aromatickým aldehydům. Pro dva nejvýznamnější substráty byly změřeny saturační křivky a určeny hodnoty Km, Vlim a katalytická účinnost (Vlim/Km). Ve výsledcích je diskutován význam jednotlivých aminokyselinových reziduí v aktivním místě enzymu.The diploma thesis is focused on a study of the active site of aldehyde dehydrogenase 2A from moss Physcomitrella patens. The theoretical part summarizes the knowledge of the moss P. patens, plant aldehyde dehydrogenase superfamily, plant aldehyde dehydrogenase from family 2 and metabolism of aldehydes. The practical part is aimed at site-directed mutagenesis of PpALDH2A gene, mutant expression in Escherichia coli and purification of recombinant proteins by affinity chromatography. Secondary structure and thermal stability of recombinant variants of PpALDH2A were verified. Moreover, substrate specificity towards aliphatic and aromatic aldehydes was studied. Saturation curves for the two most significant substrates were measured and kinetic parameters Km, Vlim and a catalytic efficiency (Vlim/Km) were determined. A significance of the individual amino acid residues in the active site of enzyme is discussed in results.
Počet záznamů: 1