Tato práce se zabývá vývinem a validací nové, rychlé a robustní metody kapalinové chromatografie s hmotnostní spektrometrií, která by umožnila stanovení plazmatických a močových metanefrinů (normetanefrinu a metanefrinu) coby metabolitů katecholaminů adrenalinu a noradrenalinu. Metanefriny jsou z klinického hlediska významnými diagnostickými markery pro diagnostiku nádorového onemocnění feochromocytomu, projevujícího se paroxysmálními záchvaty hypertenze, kontinuální hypertenzí, orthostatickou hypertenzí, palpitacemi, nevolností, nadměrným pocením, tachykardií či bolestmi hlavy. Podstata tohoto onemocnění může mít genetický základ (v současné době je sledována skupina zhruba desíti genů podílejících se na vzniku tohoto onemocnění), může se ale objevovat rovněž sporadicky. Roční incidence tohoto onemocnění je v současnosti 1 na 100 000 osob, z toho zhruba 10% případů má genetický základ. Počet pacientů je odhadován ale mnohem vyšší, poněvadž spousta případů je skryta pod diagnózou hypertenze. V současné době jsou v České republice pro laboratorní diagnostiku tohoto onemocnění používány metody RIA, ELISA, GC/MS a HPLC/ED. Ve světě se ale do popředí dostává metoda HPLC/MS, jež vyniká v konfirmaci s těmito metodami vysokou diagnostickou senzitivitou, specifitou, robustností, rychlostí a menší časovou náročností na přípravu vzorku.This work deals with the development and validation of a new rapid and robust HPLC-MS-MS analytical method for the determination of plasma and urine metanephrines. The metanephrines are metabolites of catecholamines and from the clinical point of view they serve as the gold standard for the laboratory diagnosis of rare cancer disease - pheochromocytoma. The clinical symptoms of pheochromocytoma include paroxysmal hypertension attacks, permanent hypertension, orthostatic hypertension, palpitations, nauzea, increased sweating, tachycardia and headache. The hereditary as well as sporadic forms of this disease are known and the year incidence is about 1/100 000. The proportion of hereditary forms is believed to be around 10 % however a significant number of hereditary cases seem to be undiagnosed. Various analytical methods (radioimmunoanalysis, ELISA, GC-MS, HPLC-ED etc.) for the determination of plasma and urinary metanephrines have been described. The HPLC-MS-MS method has some advantages which include increased sensitivity, specificity and simple sample pretreatment.