Halouzka, Rostislav,
Chemické metody studia strigolaktonů [rukopis] / Rostislav Halouzka. -- 2020. -- 209 s : il., grafy, tab. + 4 přílohy a autoreferát disertační práce. -- Ved. práce Petr Tarkowski. -- Abstrakt: Strigolaktony patří mezi rostlinné hormony, které hrají velmi důležitou roli v růstu a vývoji rostlin. Byly řešeny různé způsoby izolace a purifikace strigolaktonů z rostlinného materiálu (kořenů). Jako vhodný model byl vybrán zástupce z čeledi bobovitých (Fabaceae), bob setý (Vicia faba L). Vybraný izolační protokol byl použit společně s optimalizovanými podmínkami separace UHPLC-MS/MS k úspěšné identifikaci SL. Dále jsou představeny ambientní techniky jako budoucí nástroj pro analýzu SL. Obě diskutované metody (DART a DESI) významně zjednodušují přípravu vzorků. Přístup DESI navíc umožňuje zaznamenat prostorovou distribuci analytů v řezu pletiva. Strigolaktony jsou poměrně nestabilní látky, které jsou snadno hydrolyzovány i za mírných podmínek. Jedním z dalších cílů práce bylo otestování jejich chemické stability SL. Testován byl vliv rozpouštědla, kultivačních médií o definovaném složení a několik vybraných pufrů (pH 6,0 a 7,0). Výsledkem byl seznam doporučení a základních pravidel pro použití GR24 a přirozeně se vyskytujících SL. Výsledky získané z kinetických, termodynamických a spektrálních dat reakce GR24 se sedmi různými nukleofily prokázaly, že reakce probíhá prostřednictvím adičně-eliminačního mechanismu (Michaelova reakce).. -- Abstrakt: Strigolactones are phytohormones which play a key role in plant growth and development. Various methods of isolation and purification from the plant material (roots) have been studied. Sown bean (Vicia faba L.) from the family Fabaceae was chosen as a representative model plant. To successfully identify SL in various plant materials, the selected isolation protocol was used together with optimized separation conditions of UHPLC-MS/MS. In addition, ambient techniques were introduced as future tools for the SL analysis. Both methods (DART and DESI) significantly simplified sample preparation. Moreover, the DESI approach made it possible to record the spatial distribution of the analysts in a tissue section. Strigolactones are unstable substances that are easily hydrolysed even under mild conditions. The study aimed to examine the chemical stability of SL. The effect of the solvent, plant growing media with defined composition and several selected buffers (pH 6.0 and 7.0) were tested. The outcome was a list of recommendations and basic rules on how to use and apply GR24 and naturally occurring SL. Furthermore, the reaction mechanism of hydrolysis was studied. Results obtained from kinetic, thermodynamic, and mass spectral data of the reaction between widely used synthetic strigolactone analogue GR24 and seven different nucleophiles, demonstrated that the reaction proceeded via Michael addition-elimination mechanism.
Tarkowski, Petr, 1976-. Univerzita Palackého. Katedra biochemie
strigolakton. izolace. UPLC-MS/MS. rostlinné hormony. stabilita. strigolactones. isolation. UPLC-MS/MS. plant hormones. stability. disertace
(043.3)