Počet záznamů: 1  

Expression of plant hormone biosynthetic gene in mammalian cells

  1. Údaje o názvuExpression of plant hormone biosynthetic gene in mammalian cells [rukopis] / Jan Humplík
    Další variantní názvyExpression of plant hormone biosynthetic gene in mammalian cells
    Osobní jméno Humplík, Jan (autor diplomové práce nebo disertace)
    Překl.názExpression of plant hormone biosynthetic gene in mammalian cells
    Vyd.údaje2009
    Fyz.popis92 s. + 1 CD
    PoznámkaVed. práce Lukáš Spíchal
    Dal.odpovědnost Spíchal, Lukáš (vedoucí diplomové práce nebo disertace)
    Mistrík, Martin (oponent)
    Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra buněčné biologie a genetiky (udelovatel akademické hodnosti)
    Forma, žánr diplomové práce master's theses
    MDT (043)378.2
    Země vyd.Česko
    Jazyk dok.angličtina
    Druh dok.PUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitulMgr.
    Studijní programNavazující
    Studijní programBiologie
    Studijní oborMolekulární a buněčná biologie
    SignaturaČár.kódLokaceDislokaceInfo
    DP-KBB/024 (PřF-KBO)3134510517PřF-HolicePřF, Knihovna Holice - skladpouze prezenčně

    Tato studie je zaměřena na cytokininem-indukované změny v nádorové buněčné linii T-Rex Jurkat. Přestože účinek exogenně aplikovaných cytokininů na savčí buňky je již delší dobu znám, mechanismus cytokininem indukovaných změn je stále nejasný. V lidských nádorových liniích odvozených z krevních buněk byl pozorován rozdílný efekt volných bází cytokininů a jejich ribosidů: zatímco volné báze měly schopnost indukovat diferenciaci nezralých leukocytů, ribosidy navozovaly buněčnou smrt. Předpokladem této práce je hypotéza, že endogenně syntetizované cytokininy mají na savčí buňky podobné účinky jako cytokininy aplikované exogenně. Dále předpokládáme, že v mechanismu cytokinin-ribosidy indukované buněčné smrti hrají, kromě role obecné, také roli specifickou mitochondrie. Z těchto důvodů jsme navrhli a sestrojili genové konstrukty umožňující biosyntézu cytokininů jak v cytosolu, tak i přímo v mitochondriích. Dále byla provedena exogenní aplikace cytokininu N6-isopentenyladenosinu (iPR) na studovanou buněčnou linii T-Rex Jurkat a různými metodickými přístupy byly pozorovány účinky této látky. Po aplikaci iPR jsme pomocí dvou nezávislých metod, průtokové cytometrie a měření enzymatické aktivity, potvrdili aktivaci kaspázy 3, která je významným apoptotickým markerem. Jako první jsme pozorovali iPR?indukovanou expresi proteinu p53. Dále jsme také prokázali uvolnění cytochromu c z mitochondrie po aplikaci iPR, což bylo poprvé publikováno na konci našeho výzkumu. Tyto výsledky dále podporují roli mitochondriální apoptotické dráhy, jakožto obecného mechanismu iPR-indukované buněčné smrti. V budoucím výzkumu se hodláme dále zabývat specifickým mechanismem, kterým iPR tuto dráhu aktivuje. Studium efektů endogenně syntetizovaného iPR by mohlo přispět k bližšímu porozumění cytokininy?indukovaných změn v savčích buňkách. V této práci byl položen experimentální základ pro endogenní biosyntézu cytokininu a pro pozorování jejího dopadu na savčí buňku.This study is focused on cytokinin-induced changes in the T-Rex Jurkat human cancer line. Although effects of exogenously applied cytokinins are known, the mechanism of their action remains to be elucidated. In human blood cells, exogenous cytokinin free bases induce differentiation of immature cells, while application of cytokinin ribosides leads to programmed cell death. In this work we hypothesized that endogenously produced cytokinin riboside causes similar effects as exogenously supplied. Although mitochondria play a general role in programmed cell death, it is also hypothesized here that mitochondria play a specific role in cytokinin?induced action. For these reasons we designed gene constructs allowing cytokinin riboside biosynthesis in differential cell compartments (cytosol and mitochondria), to study possible cytokinin?specific role of mitochondria in programmed cell death. Exogenous treatment of T-Rex Jurkat cells with N6-isopentenyladenosine (iPR) was performed and cytokinin riboside action was evaluated by various methods. Using flow cytometry and direct measurement of enzyme activity, we confirmed that N6-isopentenyladenosine induces caspase 3 ? important marker of apoptosis. The iPR?induced activation of p53 protein was for the first time reported in this thesis. We also observed release of cytochrome c from mitochondria which was for the first time reported this year by other group. These observations suggested that iPR action is associated with stimulation of the mitochondrial apoptotic pathway which is the general mechanism of programmed cell death. However, investigation of iPR?specific effects on cell physiology remain for future research. Studies of action of endogenously produced cytokinin can contribute to better understanding of this problem. In this thesis the experimental base for investigation of cytokinin biosynthesis in mammalian cells and evaluation of its impact was built.

Počet záznamů: 1  

  Tyto stránky využívají soubory cookies, které usnadňují jejich prohlížení. Další informace o tom jak používáme cookies.