Počet záznamů: 1
Biochemická charakterizace rekombinantní S-nitrosoglutathionreduktasy z Brassica oleracea a Lactuca sativa
Údaje o názvu Biochemická charakterizace rekombinantní S-nitrosoglutathionreduktasy z Brassica oleracea a Lactuca sativa [rukopis] / Tereza Tichá Další variantní názvy Biochemická charakterizace rekombinantní S-nitrosoglutathionreduktasy z Brassica oleracea a Latuca sativa Osobní jméno Tichá, Tereza (autor diplomové práce nebo disertace) Překl.náz Biochemical characterization of recombinant enzyme S-Nitrosoglutathione reductase from Brassica oleracea and Lactuca sativa Vyd.údaje 2013 Fyz.popis 123 s (202 400 znaků) : il., grafy, schémata, tab. + 1 CD ROM Poznámka Ved. práce Lenka Luhová Oponent Mária Šmehilová Dal.odpovědnost Luhová, Lenka (vedoucí diplomové práce nebo disertace) Škrabišová, Mária, 1982- (oponent) Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra biochemie (udelovatel akademické hodnosti) Klíč.slova Oxid dusnatý * S-nitrosoglutathionreduktasa * patogeneze * Nitric oxide * S-nitrosoglutathione reductase * pathogenesis Forma, žánr diplomové práce master's theses MDT (043)378.2 Země vyd. Česko Jazyk dok. čeština Druh dok. PUBLIKAČNÍ ČINNOST Titul Mgr. Studijní program Navazující Studijní program Biochemie Studijní obor Biochemie kniha
Kvalifikační práce Staženo Velikost datum zpřístupnění 00179532-749801302.pdf 53 1.1 MB 26.04.2013 Posudek Typ posudku 00179532-ved-208926685.pdf Posudek vedoucího 00179532-opon-927977070.pdf Posudek oponenta Signatura Čár.kód Lokace Dislokace Info DP-KBC/194 (PřF-KBO) 3134515340 PřF-Holice PřF, Knihovna Holice - sklad pouze prezenčně
Diplomová práce je zaměřena na studium rostlinné S-nitrosoglutathionreduktasy (GSNOR) náležící do rodiny alkoholdehydrogenas třídy III (EC 1.1.1.1). Enzym je rovněž znám jako S-(hydroxymethyl)glutathiondehydrogenasa (EC 1.1.1.284) díky katalýze NAD+-dependentní oxidace S-(hydroxymethyl)glutathionu (HMGSH). Za fyziologicky významnější je považována katalýza NADH-dependentní redukce S-nitrosoglutathionu (GSNO), ovlivňující celkový metabolismus reaktivních forem dusíku v buňkách. GSNOR představuje klíčový regulátor nejen metabolismu S-nitrosothiolů, ale plní svou funkci v obranné reakci na abiotické a biotické stresové faktory. V první části experimentální práce byly charakterizovány molekulové a kinetické vlastnosti rekombinantních enzymů GSNOR z Brassica oleracea var. botrytis (BoGSNOR) a Lactuca sativa UCDM2 (LsGSNOR). Oba byly heterologně exprimovány v E. coli jako N-terminální proteiny nesoucí 6xHis-Tag a purifikovány metodou chelatační chromatografie. BoGSNOR složená z 379 aminokyselin a LsGSNOR složená z 377 aminokyselin se vyskytují v nativní formě jako dimery a vykazují vysokou teplotní stabilitu. Ačkoliv byla u obou enzymů pozorována široká substrátová specifita pro řadu alkoholů s vyšším počtem uhlíků a omega-hydroxymastných kyselin v přítomnosti NAD+, preferují jako hlavní substráty GSNO a HMGSH. U nekompetitivního inhibitoru N6022 byla prokázána vysoká inhibiční schopnost (IC50 BoGSNOR = 321 nM), u ostatních inhibitorů byly hodnoty IC50 o 1-2 řády vyšší. V druhé části experimentální práce, zabývající se řešením role GSNOR v průběhu patogeneze, byly sledovány změny aktivity enzymu u modelového patosystému Bremia lactucae x Lactuca spp., tvořeného pěti genotypy s odlišnou rezistencí vůči patogenu.The thesis is focused on the study of plant S-nitrosoglutathione reductase (GSNOR) belonging to the family of class III alcohol dehydrogenases (EC 1.1.1.1). The enzyme is also known as S-(hydroxymethyl)glutathione dehydrogenase (EC 1.1.1.284) due to catalysis NAD+-dependent oxidation of S-(hydroxymethyl)glutathione (HMGSH). Physiologically more important is NADH-dependent reduction of S-nitrosoglutathione (GSNO), which can affecting the overall cellular metabolism of reactive nitrogen species. GSNOR is not only a key regulator of metabolism of the S-nitrosothiols, but performs its function in a defense responses to abiotic and biotic stress. In the first part of the experimental work were characterized molecular and kinetic properties of the recombinant enzyme GSNOR from Brassica oleracea var. botrytis (BoGSNOR) and Lactuca sativa UCDM2 (LsGSNOR). Both were heterologous expressed in E. coli as N-terminal proteins carrying 6xHis-Tag and purified by chelating chromatography. Both, BoGSNOR composed of 379 amino acids and LsGSNOR composed of 377 amino acids, occur in native form as a dimers and exhibit high thermal stability. Although both enzymes showed a broad substrate specificity for a long-chain alcohols and omega-hydroxyfatty acids in the presence of NAD+, they prefer as the main substrates GSNO and HMGSH. The non-competitive inhibitor N6022 was found to have a high inhibitory capacity (IC50 BoGSNOR = 321 nM), other inhibitors showed the IC50 values higher by 1-2 orders of magnitude. Also was solved the role of GSNOR during pathogenesis. As the model pathosystem served Bremia lactucae x Lactuca spp., consisting of five genotypes with different resistance to the pathogen.
Počet záznamů: 1