Tato práce se zaměřuje na popsání variability populací označovaných v literatuře jako Dactylorhiza maculata subsp. transsilvanica na Moravě a v přilehlé části Slovenska. Šest populací tohoto taxonu bylo studováno z hlediska morfologické a karyologické variability. Metodou průtokové cytometrie nebyla zjištěna žádná cytotypová variabilita mezi populacemi a jejich obsah DNA odpovídal tetraploidnímu stavu 2n = 80. Studované populace byly podrobeny rovněž morfometrické analýze. U většiny morfologických znaků byla prokázána statisticky signifikantní odlišnost mezi některými populacemi. V nejvíce znacích se odlišovala populace na lokalitě Abrod (Záhorská nížina). Dále byly zjišťovány rozdíly mezi populacemi D. maculata subsp. transsilvanica a D. fuchsii v pohoří Moravskoslezské Beskydy. Obsah DNA zjištěný metodou průtokové cytometrie se u všech populací shodoval a odpovídal tetraploidnímu stavu 2n = 80. Tento počet chromosomů byl u jedné rostliny potvrzen metodou roztlakových preparátů nezralých prašníků. Většina rozlišovacích morfologických znaků uváděných v literatuře neposkytovala signifikantní výsledek. Mezi některými populacemi D. maculata subsp. transsilvanica byly zjištěny větší rozdíly, než mezi oběma studovanými taxony v oblasti Moravskoslezských Beskyd. Na základě těchto poznatků byly navrženy změny v taxonomii okruhu D. maculata.This thesis is focused on describing variability of populations in literature mentioned as Dactylorhiza maculata subsp. transsilvanica in Moravia and adjacent part of Slovakia. Six populations of this taxon were studied in terms of morphological and karyological variability. No cytotype variability among populations was discovered by the method of flow cytometry. Their DNA content was in accordance with those of tetraploids 2n = 80. A morphological analysis of the studied populations was accomplished. Statistically significant differences between some populations were found in most morphological characteristics. The most distinguishing characteristics were observed in the population in the locality Abrod (Záhorská nížina lowland). Differences were investigated also between the populations of D. maculata subsp. transsilvanica and D. fuchsii in the Moravian-Silesian Beskids. DNA content observed by the method of flow cytometry was equal and was in accordance with those of tetraploids 2n = 80. This chromosome number was confirmed for one specimen by the method of preparation of immature anthers squash. Most of the morphological characteristics, that should be distinguishing according to the literature, did not give significant results. More significant differences were found between some populations mentioned as D. maculata subsp. transsilvanica than between both studied taxa in the Moravian-Silesian Beskids area. On the basis of those knowledge, changes were suggested in taxonomy of the D. maculata group.