Viacfarebné imunohistochemické / imunofluorescenčné značenie je metodika na označenie viacerých markerov v rámci jednej vzorky. Diplomová práca sa zaoberá optimalizáciou techniky imunofluorescenčného značenia zamrazených tkanív a buniek. Počas optimalizácie bola validovaná protilátka na detekciu SSEA4 glykosfingolipidu u karcinómu prostaty. Práca sa ďalej venuje optimalizácii multiplexného imunofluorescenčného značenia na analýzu imunofenotypu kolorektálneho karcinómu. Súčasťou čoho bola študovaná problematika autofluorescencie a boli porovnané protokoly s konjugovanými protilátkami a postup amplifikácie signálu tyramidom. Výsledky našich imunofluorescenčných experimentov potvrdili SSEA4 expresiu v normálnom aj nádorovom tkanive prostaty. Optimalizovaný postup multiplexnej imunohistochémie bude využitý pre štúdium imunofenotypu vybraných proteínov u kolorektálneho karcinómu.Multiplex immunohistochemistry / immunofluorescence staining is a method used for the labelling multiple markers within one sample. This thesis deals with the optimization of technique for immunofluorescence labelling of frozen tissue and cells. During the optimization process the antibody for the detection of SSEA4 glycosfingolipid was validated in prostate cancer. Next, we focused on the optimization of multiplex immunofluorescence staining for the analysis of the immunophenotype of colorectal cancer. As a part of this study, the issue of autofluorescence was studied and the protocols with conjugated antibodies and the tyramide signal amplification systems were compared. The results of our immunofluorescence experiments confirmed expression of SSEA4 in both normal and prostate cancer tissue. The optimized multiplex immunohistochemistry staining will be used to study the immunophenotype of colorectal cancer.