Cílem předložené diplomové práce bylo vyvinout vhodnou metodu pro analýzu vitaminů D (D2 a D3) plynovou chromatografií. Navržená metoda pro analýzu vitaminů D plynovou chromatografií zahrnovala alkalickou hydrolýzu, extrakci kapalina-kapalina a derivatizaci pomocí silylačního činidla N,O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamidu (BSTFA). Kvantitativní vyhodnocení získaných výsledků bylo provedeno metodou kalibrační křivky a metodou vnitřního standardu. Plynová chromatografie byla použita k zjištění koncentrace vitaminu D2 v sedmi druzích hub, které byly podrobeny účinku UV záření za účelem zjistit, jaký vliv bude mít UV záření na obsah tohoto vitaminu v houbách. Ukázalo se, že zásadní vliv měla nejen doba expozice, ale i vlnová délka použitého UV záření. Ozářené vzorky hub tak obsahovaly podstatně více vitaminu D2 než vzorky neozářených hub. Zmíněná technika byla také využita ke zjištění koncentrace vitaminu D3 v jedenácti druzích potravin živočišného původu.The aim of the submitted thesis was to develop a suitable method for the analysis of vitamins D (D2 and D3) by gas chromatography. The proposed method for the analysis of vitamins D by gas chromatography included alkaline hydrolysis, liquid-liquid extraction and derivatization with silylation agent N,O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide (BSTFA). A quantitative evaluation of the obtained results was performed using the calibration curve method and the internal standard method. Gas chromatography was used to determine the concentration of vitamin D2 in seven species of UV-exposed mushrooms to find out the effect of UV radiation on the content of this vitamin in mushrooms. It turned out that not only the exposure time but also the wavelength of the used UV radiation had a major effect. The irradiated mushrooms samples contained significantly more vitamin D2 than samples of non-irradiated mushrooms. The technique was also used to determine the concentration of vitamin D3 in eleven food of animal origin.