Popovičová, Lucie
Charakterizace nukleosid-N-ribohydrolasy 2b z kukuřice seté (Zea mays) [rukopis] / Lucie Popovičová. -- 2013. -- 49 : il., grafy, schémata, tab. + 2 CD ROM. -- Oponent Lenka Luhová. -- Ved. práce David Kopečný. -- Abstrakt: Tato práce se zabývá purifikací a charakterizací nukleosid-N-ribohydrolasy 2b (NRH2b) z kukuřice seté (Zea mays). V teoretické části této bakalářské práce bylo cílem vypracovat literární rešerši zahrnující metabolismus purinů a pyrimidinů v rostlinách. Dále jsou popsány jednotlivé metody, použité substráty a také popis rostliny Zea mays. Experimentální část se věnuje expresi genů ZmNRH2a a ZmNRH2b v buňkách E. coli. a následné purifikací rekombinantních proteinů metodou afinitní chromatografie. Analýza pomocí SDS-PAGE ukázala, že rekombinantní enzym ZmNRH2b je produkován v mnohonásobně vyšší míře než ZmNRH2a . Tento enzym se vyskytuje jako dimer s molekulovou hmotností 78 kDa. Dále byla studována teplotní stabilita, substrátová specificita enzymu a kinetické parametry Km a Vmax s použitím několika purinových a pyrimidinových nukleotidů.. -- Abstrakt: This work deals with the purification and characterization of nucleoside-N-ribohydrolase 2b (NRH2b) from maize (Zea mays). The theoretical part of this thesis was aimed on a review of purine and pyrimidine metabolism in plants. Further on, description of the methods, substrates and a description of the maize plant is provided. The experimental part deals with the expression of genes ZmNRH2a and ZmNRH2b genes in E. coli cells and subsequent purification of recombinant proteins by affinity chromatography. Analysis by SDS-PAGE showed that the recombinant enzyme ZmNRH2b is produced in much higher yield than ZmNRH2a. The enzyme occurs as a dimer with a molecular weight of 78 kDa. Further on, the thermal stability, substrate specificity and kinetic parameters Km and Vmax were investigated using several purine and pyrimidine ribosides.
Luhová, Lenka. Kopečný, David. Univerzita Palackého. Katedra biochemie
Nukleozid-N-ribohydrolasa. metabolismus. pyrimidin. purin. nukleozid. ribozid. kukuřice setá. Nucleoside-N-ribohydrolase. metabolism pyrimidine. purine. nucleoside. riboside. Zea mays. bakalářské práce
(043)378.22