Lasotová, Ester
Exprese a charakterizace kukuřičné isopentenyltransferasy [rukopis] / Ester Lasotová. -- 2013. -- 47 s. -- Ved. práce Jitka Frébortová. -- Oponent Lenka Dzurová. -- Abstrakt: Biosyntéza cytokininů vznikajících degradací tRNA je katalyzována enzymem tRNA isopentenyltransferasou, který katalyzuje přenos isopentenylové skupiny DMAPP na adenin v poloze 37 některých tRNA. Cílem této bakalářské práce bylo izolovat a charakterizovat tRNA-IPT z kukuřice, která je označena jako ZmIPT10. Pro expresi genu v E. coli byl použit rekombinantní plasmid pTYB12::ZmIPT10. Izolovaný protein byl postupně purifikován na třech různých chromatografických kolonách a pomocí hmotnostní spektrometrie byla provedena identifikace získaného proteinu. Enzym nevykazoval aktivitu při přenosu prenylové skupiny z DMAPP nebo cHMBDP na AMP nebo ATP. Další studie budou zaměřeny na stanovení aktivity ZmIPT10 pomocí metod, které využívají jako substrát nemodifikovanou tRNA nebo syntetizovaný tRNA oligoribonukleotid.. -- Abstrakt: The cytokinin biosynthesis via tRNA degradation is catalyzed by a tRNA isopentenyl transferase, that catalyses the transfer of an isopentenyl group from DMAPP to adenine at position 37 of a certain tRNA. The aim of this bachelor work was to isolate and characterize the tRNA-IPT in maize (Zea mays) that is named as ZmIPT10. Recombinant plasmid pTYB12::ZmIPT10 was used for the expression in E. coli. The isolated protein was purified on three different chromatographic columns and the identity of an obtained protein was confirmed by mass spectrometry. The enzyme activity, measured as a transfer of prenyl moiety from DMAPP or cHMBDP to AMP or ATP, was not detected. Further studies will focus on determining the ZmIPT10 activity using other methods that use unmodified tRNA or synthesized tRNA oligoribonucleotide as a substrate.
Frébortová, Jitka. Dzurová, Lenka. Univerzita Palackého. Katedra biochemie
Cytokinin. biosyntéza cytokininu. tRNA isopentenyltransferasa. Cytokinin. cytokinin biosynthesis. tRNA isopentenyl transferase. bakalářské práce
(043)378.22