Práce pojednává o problematice analýzy návykových látek metodou HPLC-FLD s předcházející fluorescenční derivatizací. Teoretická část je zaměřena na obecné principy fluorescenční analýzy, využití fluorescenční derivatizace v kapalinové chromatografii a na charakteristiku zkoumaných látek. Praktická část je věnována popisu experimentů, jejichž cílem bylo vypracovat derivatizační protokol pro vývoj metod forenzní analýzy. Jedná se o optimalizaci přidávaného množství fluorescenčního činidla dansylchloridu, pH, reakční teploty a doby reakce. V rámci měření byly optimalizovány rovněž některé parametry fluorescenčního detektoru (vlnová délka excitačního a emisního záření, funkce PMT-GAIN). Pomocí takto vypracované metodiky byla provedena kvantitativní analýza modelové směsi metodou vnějšího standardu.This thesis deals with drug analysis by HPLC-FLD method with foregoing fluorescence derivatization. The aims of the theoretical part of this work are general principles of fluorescence analysis, application of fluorescence derivatization in liquid chromatography and the characteristics of analysed drugs. Experimental part contains description of experiments. The aim of these experiments was development of derivatization protocol for forensic analysis method. Optimized conditions were ammount of fluorescence agent dansylchloride, pH value, temperature and reaction time. During measurements were also optimized parameters of fluorescence detector (wavelenght of exciting and emitted radiation and function PMT-GAIN). Developed derivatization protocol was used for quantitative analysis of model mixture of selected drugs using calibration curve method.