Počet záznamů: 1
Vývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning
Údaje o názvu Vývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning [rukopis] / Marek Kucej Další variantní názvy Vývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning Osobní jméno Kucej, Marek, (autor diplomové práce nebo disertace) Překl.náz Engineering suspension HEK293OX stable cell lines for CRISPR-based screening Vyd.údaje 2021 Fyz.popis 81 : grafy, tab. Poznámka Oponent Jiří Drábek Ved. práce David W Brighty Dal.odpovědnost Drábek, Jiří, 1969- (oponent) Brighty, David W, (vedoucí diplomové práce nebo disertace) Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra biochemie (udelovatel akademické hodnosti) Klíč.slova CRISPR/Cas * HEK293 * spCas9 * dCas9_VPR * CRISPR/Cas * HEK293 * spCas9 * dCas9_VPR Forma, žánr diplomové práce master's theses MDT (043)378.2 Země vyd. Česko Jazyk dok. angličtina Druh dok. PUBLIKAČNÍ ČINNOST Titul Mgr. Studijní program Navazující Studijní program Biochemie Studijní obor Biochemie kniha
Kvalifikační práce Staženo Velikost datum zpřístupnění 00234354-538675192.pdf 0 1.5 MB 31.12.2999 Posudek Typ posudku 00234354-ved-577083116.pdf Posudek vedoucího 00234354-opon-558825055.pdf Posudek oponenta
V tejto práci boli vyvinuté dve klonálne bunkové línie exprimujúce varianty proteínu Cas9: jedna bunková línia exprimujúca divoký typ spCas9, druhá exprimujúca dCas9_VPR fúzny proteín. Suspenzné HEK293OX bunky boli transdukované lentivírusovými časticami kódujúcimi použité dva transgény. Transdukované bunky boli selektované antibiotikom pre vytvorenie stabilného fondu. Stabilné fondy slúžili ako základ pre vytvorenie klonálnej bunkovej línie. Klonálne bunkové línie boli získané z jednotlivých buniek cez proces bunkového triedenia, výberu klonov a ich expanzie. U stabilných klonálnych línií bola úspešne preukázaná integrácia provírusu nesúceho transgén, expresia transgénu a jeho funkčnosť.In this thesis, two clonal cell lines expressing Cas9 protein variants were generated: one cell line expressing the wild type spCas9, another expressing dCas9_VPR fusion protein. Suspension HEK293OX cells were transduced with lentiviral particles encoding the two transgenes. Transduced cells underwent a selection process to generate a stable pool. Stable pools served as basis for clonal cell line generation. Clonal cell lines were obtained from single cells through single cell sorting, clone hitpicking and expansion. Stable clonal cell lines were successfully validated for transgene containing provirus integration, expression, and function.
Počet záznamů: 1