Počet záznamů: 1  

Vývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning

  1. Údaje o názvuVývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning [rukopis] / Marek Kucej
    Další variantní názvyVývoj stabilných suspenzných HEK293OX bunkových línií pre CRISPR skríning
    Osobní jméno Kucej, Marek, (autor diplomové práce nebo disertace)
    Překl.názEngineering suspension HEK293OX stable cell lines for CRISPR-based screening
    Vyd.údaje2021
    Fyz.popis81 : grafy, tab.
    PoznámkaOponent Jiří Drábek
    Ved. práce David W Brighty
    Dal.odpovědnost Drábek, Jiří, 1969- (oponent)
    Brighty, David W, (vedoucí diplomové práce nebo disertace)
    Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra biochemie (udelovatel akademické hodnosti)
    Klíč.slova CRISPR/Cas * HEK293 * spCas9 * dCas9_VPR * CRISPR/Cas * HEK293 * spCas9 * dCas9_VPR
    Forma, žánr diplomové práce master's theses
    MDT (043)378.2
    Země vyd.Česko
    Jazyk dok.angličtina
    Druh dok.PUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitulMgr.
    Studijní programNavazující
    Studijní programBiochemie
    Studijní oborBiochemie
    kniha

    kniha

    Kvalifikační práceStaženoVelikostdatum zpřístupnění
    00234354-538675192.pdf01.5 MB31.12.2999
    PosudekTyp posudku
    00234354-ved-577083116.pdfPosudek vedoucího
    00234354-opon-558825055.pdfPosudek oponenta

    V tejto práci boli vyvinuté dve klonálne bunkové línie exprimujúce varianty proteínu Cas9: jedna bunková línia exprimujúca divoký typ spCas9, druhá exprimujúca dCas9_VPR fúzny proteín. Suspenzné HEK293OX bunky boli transdukované lentivírusovými časticami kódujúcimi použité dva transgény. Transdukované bunky boli selektované antibiotikom pre vytvorenie stabilného fondu. Stabilné fondy slúžili ako základ pre vytvorenie klonálnej bunkovej línie. Klonálne bunkové línie boli získané z jednotlivých buniek cez proces bunkového triedenia, výberu klonov a ich expanzie. U stabilných klonálnych línií bola úspešne preukázaná integrácia provírusu nesúceho transgén, expresia transgénu a jeho funkčnosť.In this thesis, two clonal cell lines expressing Cas9 protein variants were generated: one cell line expressing the wild type spCas9, another expressing dCas9_VPR fusion protein. Suspension HEK293OX cells were transduced with lentiviral particles encoding the two transgenes. Transduced cells underwent a selection process to generate a stable pool. Stable pools served as basis for clonal cell line generation. Clonal cell lines were obtained from single cells through single cell sorting, clone hitpicking and expansion. Stable clonal cell lines were successfully validated for transgene containing provirus integration, expression, and function.

Počet záznamů: 1  

  Tyto stránky využívají soubory cookies, které usnadňují jejich prohlížení. Další informace o tom jak používáme cookies.